[发明专利]花毛茛的组织培养与快速繁殖方法

摘要

本发明提供一种花毛茛的组织培养与快速繁殖方法，它采用种球催芽、外植体灭菌、不定芽诱导培养、不定芽继代培养、生根培养和过渡移栽等工艺步骤，并在所对应的各培养基上进行培养，直至长成生根苗后直接移栽即可。该方法解决了花毛茛无菌体系建立的关键技术，同时通过激素、营养、培养环境的综合调节，达到了进种效率高，增殖速度快，生产技术稳定目的。实现了花毛茛优良品种的规模化生产。

主权项

1、一种花毛茛的组织培养与快速繁殖方法，其特征在于经过下列工艺步骤：A、种球催芽：种球先在清水中浸泡8-10小时，之后播种于含水量在20-30％的基质中，在10-12℃进行催芽培养，待萌芽长到1-2cM的锥形并未展叶时，将芽从种球基部取下，取完芽后的种球放入基质中继续催芽；B、外植体灭菌：将嫩芽依次在75％的酒精、0.15％的Hgcl2、1.5％的次氯酸钠溶液中进行消毒灭菌处理，其时间依次是消毒20-40秒，灭菌10-30分钟，再消毒10-20分钟，最后用无菌水漂洗至少2次；C、不定芽诱导培养：将经过消毒灭菌后的上述嫩芽在无菌工作环境中接种于下列诱导培养基中：MS培养基BA 0.5-2.0mg/LNAA 0.1-0.5mg/L糖 30-40g/L，琼脂 5.5g/L控制PH为6.0，光照时间10-12小时，光照强度为2000Lx，培养温度为20-22℃，待锥形芽长成有叶的小苗后，将小苗去叶并在相同的培养基上进行继代转接2-3次后，在小苗的基部和叶腋间长出2-4个不定芽，继代4-5代后可得丛生芽；D、不定芽继代培养：将上述丛生芽置于下列增殖培养基中进行继代培养：MS培养基BA 0.2-0.8mg/LNAA 0.1-0.5mg/L，糖 30-40g/L，琼脂 5.5g/L控制PH为6.0，光照时间为10-12小时，光照强度为2000Lx，培养温度为20-22℃，每15天继代一次，继代5-6代；E、生根培养和过渡移栽：将上述继代增殖中得到的不定芽分切成单株，接种在下列生根培养基上：MS培养基BA 0.1-0.4mg/L，NAA 0.1-0.4mg/L，糖 30-40g/L，琼脂 5.5g/L控制PH为6.0，光照时间为10-12小时，光照强度为2000Lx，培养温度为20-22℃，培养15天后，小芽苗长大并生根，洗去附在生根苗上的琼脂，放入浓度为0.2％的多菌灵溶液中消毒分钟，直接移栽于腐殖土∶红土＝10∶1的基质中，待苗叶色浓绿并产生大量须根时，进行移栽种植。