[发明专利]人源甲硫氨酰氨肽酶1的表达方法及它在寻找抗肿瘤药物中应用无效
| 申请号： | 200310108025.5 | 申请日： | 2003-10-20 |
| 公开（公告）号： | CN1609221A | 公开（公告）日： | 2005-04-27 |
| 发明（设计）人： | 李佳;南发俊;叶其壮;李静雅;罗群力;陈玲玲;崔永梅 | 申请（专利权）人： | 中国科学院上海药物研究所 |
| 主分类号： | C12N15/52 | 分类号： | C12N15/52;C12N9/48;C12Q1/25 |
| 代理公司： | 上海开祺专利代理有限公司 | 代理人： | 费开逵;季良赳 |
| 地址： | 201203上海市浦*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种人源I型甲硫氨酰氨肽酶HsMetAP1在原核生物大肠杆菌的表达系统，并纯化得到活性蛋白并找到了其活性关键结构的要求；本发明公开了建立HsMetAP1的高通量筛选模型，应用该模型筛选得到活性化合物，找到了活性化合物具有抑制肿瘤细胞生长的活性，以及人源I型甲硫氨酰氨肽酶与肿瘤之间的关系。 | ||
| 搜索关键词： | 人源甲硫氨酰 氨肽酶 表达 方法 寻找 肿瘤 药物 应用 | ||
【主权项】：
1、一种人源I型甲硫氨酰肽酶(HsMetAP1)及它的缺失突变(HsMetAP1Δ1-66，HsMetAP1Δ1-135)的表达方法，包括如下步骤：(1)设计不同的正、反向引物；(2)以人源膀胱细胞ECV304的总RNA为模板用RT-PCR方法得该细胞的cDNA，利用上述设计的引物和得到的cDNA用PCR方法得到HsMetAP1的编码序列；(3)用内切酶EcoR I和Sal I双酶切质粒载体pGEX-KG用T4连接酶连接、纯化得重组质粒pGEX-KG/HsMetAP1；(4)将上述重组质粒转化入大肠杆菌表达，经提取、纯化得活性蛋白HsMetAP1或HsMetAP1Δ1-66，HsMetAP1Δ1-135。
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