[发明专利]使用经过加工的临床样品通过涂片显微镜检术、培养和聚合酶链式反应诊断结核的方法及其试剂盒

摘要

本发明涉及加工临床样品以便通过涂片显微镜检术、培养或PCR诊断细菌性感染的方法和用于实施该方法的试剂盒。本发明还涉及两组对结核分枝杆菌的DevR基因具有特异性的引物以及使用所述引物通过PCR筛选结核病患者的方法。

主权项

1.一种有效且经济的加工可用于简单、快速、安全、灵敏且准确地诊断细菌感染的临床样品的方法，该方法使用包含由通用样品加工(USP)溶液(由浓度3至6M的盐酸胍(GuHCl)、浓度40-60mM且pH7.3-7.7的Tris-Cl、浓度20-30mM的EDTA、浓度0.3-0.8％的十二烷基肌氨酸钠、浓度0.1-0.3M的β-巯基乙醇组成)组成的溶液1、由浓度65-70mM且pH6.7-6.8的磷酸钠组成的溶液2(可选择地，可以由无菌水替代)、和由浓度0.03-0.08％的Tween 80组成的溶液3、及用于分离DNA的包含浓度8-12％的Chelex 100悬浮液的溶液A、由浓度0.02-0.04％的Triton X-100组成的溶液B和包含浓度0.2-0.4％的Tween 20的溶液C(任选地，可以使用单独溶液3或具有0.03-0.1％ Triton X 100的溶液3代替溶液A、B和C从含高杆菌载量或低废料的样品分离DNA)的组合物，所述方法包括步骤：a.获得临床样品，b.将1.5至2体积的溶液1与样品混合，c.匀浆混合物并避免起泡，d.向匀浆物添加溶液2或无菌水，之后离心获得沉淀，e.任选地取决于沉淀体积的减少，用溶液1洗涤沉淀，f.用水洗涤经溶液1洗涤的沉淀，和g.将水洗涤后的沉淀重悬在溶液3中，以得到用于诊断的经加工样品。