[发明专利]发酵生产高碱碱性蛋白酶的方法

摘要

发酵生产高碱碱性蛋白酶的方法，属于由嗜碱性枯草芽孢杆菌，生产高碱碱性蛋白酶的方法。它解决了我国碱性蛋白酶活力低及成本较高的问题。其技术方案是由嗜碱性枯草芽孢杆菌为菌种、以廉价原料为培养基，采取流加碱或酸、调节pH控制发酵，得到具有高酶活力的粗酶液。该法工艺简单，易推广，降低了生产成本，适合工业化生产；为洗涤剂行业提供优质、廉价的酶制剂，促进其在洗涤剂中的大量应用，为酶制剂、洗涤剂工业的发展提供了有效途径。具有经济效益和社会效益。该产品在改善人民生活质量、降低劳动强度、保护环境等方面发挥了重要作用。它还可广泛用于日用化工、食品、环保、医药及一些新兴产业中，发展前景极其广阔，

主权项

1.发酵生产高碱碱性蛋白酶的方法，其特征在于采用嗜碱性枯草芽孢杆菌 为菌种，发酵培养基主要成分以廉价的麦芽糊精、棉籽饼粉为原料，通过流加适 量的碱或酸调节溶液pH来控制发酵，得到具有高酶活力的粗酶液；具体包括以 下内容： (一)培养基 ●斜面培养基：牛肉膏5.0～9.5g 酵母浸粉0.5～5.0g 氯化钠1.0～4.0g 酪素4.0～8.0g 多聚蛋白胨4.5～8.5g 琼脂18～20g 水1000ml ●种子培养基：胰蛋白胨3～7g 酵母浸粉3～7g 葡萄糖5～15g 水1000ml ●发酵培养基：酵母浸粉13～20g 棉籽饼粉30～50g 麦芽糊精100～150g 柠檬酸钠2～5g 氯化钙2～5g 水1000ml (二)发酵工艺方法 ●工序：菌种→一级液体培养→二级液体培养→发酵罐发酵→离心； 其具体方法如下： ●一级液体培养：将平板上单菌落接入种子培养基，30～37℃摇床培养 8～14小时，进行一级液体培养； ●二级液体培养：以2～5％的接种量接种于新鲜种子培养基，30～37℃摇 床培养6～14小时，进行二级液体培养； ●发酵罐发酵：以2～5％的接种量接种于发酵培养基，30～37℃培养40～60 小时，进行液体深层发酵培养；在发酵过程中，采取调节pH的方法控制发酵， 即：将种子接种于发酵培养基后，使发酵液初始pH为7.0～7.5；在发酵期间， 当发酵液酸性逐渐增加时，应控制发酵液pH不低于6.0；随后，当发酵液碱性 逐渐增加时，应控制发酵液pH不高于8.0；为此，调节pH的方法分别是：初始 pH的调节，可以通过添加浓度为1.0％～2.5％的磷酸缓冲液实现，发酵期间pH 的调节，视发酵液pH的具体情况，并根据发酵需要，通过流加碱或酸溶液实现； ●离心：将发酵液进行离心，上清液即为粗酶液； 发酵所得粗酶液以Folin试剂显色法进行测定，使酶促反应在40℃、pH11 的条件下进行，其酶活力不低于32000u/ml。