[发明专利]家蚕丝素固定化细胞生产L－天门冬氨酸的工艺

摘要

本发明属于生物工程制药技术领域的生产工艺，特指家蚕丝素固定化细胞生产L－天门冬氨酸的工艺。其使用丝素凝胶固定化大肠杆菌生产氨基酸，克服了上述丝素凝胶固定化酶存在的固定化以后酶的总活力回收率低，工业化成本很高；固定化细胞的载体生物包容性差，工业化的成本偏高的不足，大大延长固定化细胞的使用寿命。而本发明采用的原料为废蚕丝，是丝绸工业的废料，属废物利用，故原料成本低，而且综合效益高。

主权项

1.家蚕丝素固定化细胞生产L-天门冬氨酸的工艺，其特征在于：其制备L-天门冬氨酸的工艺过程为：(1)称取一定量蚕丝下脚料，Na2CO3溶液煮沸脱胶，洗净，得到丝素纤维，完成蚕丝的净化与脱胶处理；(2)将丝素纤维用CaCl2溶解丝素纤维，于流水中透析，得到无色透明丝素溶液，浓缩至浓度为20-30％备用，完成丝素的溶解、脱盐；(3)用低浓度环氧化合物(分子量1000-8000)处理丝素溶液；(4)按常规方法培养大肠杆菌；(5)将收集好的菌体悬浮于生理盐水中，于40-50℃水浴中保温，备用。将制备好的交联丝素溶液，然后冷却至40-50℃。在水浴中，将两者混匀后放入灭过菌的容器中形成液层，于冰箱中冷却固化成凝胶，取出后置于磷酸缓冲液中，于冰箱中搅拌后用KCl溶液洗涤后切成立方小块备用，完成丝素凝胶固定化细胞的制备；(6)将填充柱式生物反应器安装于37℃的恒温生化培养箱中，将准备好的固定化大肠杆菌细胞凝胶块装填于反应器内，形为固定化活细胞生物反应器；(7)先将延胡索酸铵与MgCl2的混和液，过滤后加热，配制底物溶液放置于恒温生化培养箱中，使底物流过固定化大肠杆菌生物反应器进行转化反应；(8)采用常规方法进行L-天门冬氨酸的分离与纯化。