[发明专利]一种纳米放大检测的方法

摘要

本发明公开了一种纳米放大检测的方法，首先是蛋白质芯片的制备，采用硅烷化处理过的玻片为固相支持物，将阳性对照，用于检测蛋白质和阴性对照分别点于玻片上，一定温度和时间，室温下放置；其次是制备胶体金，将一定量胶体金调至pH值，分别加入系列稀释的等标蛋白，混匀，室温下静置后分别加入氯化钠溶液。利用银原子可被胶体金吸附的特点，以银显影液来定位胶体金沉积部位进行银加强，提高了检测灵敏度，成本低廉，方便快速。

主权项

1、一种纳米放大检测的方法，它包括下列步骤：A、检测体内疾病的特异性蛋白质芯片的制备：采用硅烷化处理过的玻片为固相支持物，将阳性对照、用于检测的蛋白质和阴性对照分别点于玻片之上，温度32℃-40℃，湿度70％-90％的条件下固定1-2小时，以10-30ml磷酸缓冲盐溶液洗涤除去未结合的蛋白和杂质，4℃保存，使用前于室温下放置20-30分钟；B、蛋白质芯片的制备：首先制备胶体金，先将0.1-0.2mg/ml氯金酸溶液100ml-200ml放入微波炉中，在沸腾2-3min，一次加入6.0-12.0ml 10-20mg/m1柠檬酸三钠水溶液，放入微波炉中保持2-3min，为10-20nm的胶体金，放置于4℃保存，制备胶体金后，确定胶体金与待标记蛋白的用量比，取10-20管各0.5ml-1ml的胶体金，调至pH值为6-10，分别加入5-40mg待标记蛋白，混匀，室温下静置5-10分钟后加入总体积1/10-1/20量的的氯化钠溶液，室温下放置1-2小时，观察其颜色变化，记下未变色管中所加最少待标记抗体量，实际标记中以此量增加10％-20％为实验用量，取10-20μl胶体金标记蛋白质溶液，加入20-40μl待检样品，用磷酸盐缓冲液稀释至500-1000μl，32-40℃下振荡备用，将以上配置的杂交缓冲液覆盖于玻片之上，32-40℃杂交5-15分钟后弃去，以10-30ml 8×磷酸盐洗液洗涤2-5次后，再以10-30ml 1×磷酸盐洗液洗涤1-3次，每次1-3分钟；C、将染色液和硝酸银水溶液以49-99∶1的比例混合均匀，覆盖于玻片之上，显色时间为2-5分钟，观察结果。