[发明专利]一种快速检测风疹病毒抗体的酶免疫学方法

摘要

本发明公开了一种快速检测风疹病毒抗体的酶免疫学方法，主要是利用PEG可以加快抗原抗体反应，从而缩短常规ELISA的反应时间。首先将可溶性抗原包被于酶标板中；其次是配制PH9.6的PBS洗液和含PEG的样本稀释液；第三是将待测血清及阳性对照和阴性对照血清用含PEG的样本稀释液稀释；第四将稀释好的血清加入前述酶标板孔中温育；第五是甩去酶标板孔内的抗原溶液，用PBS洗液洗涤；第六是将已知的酶标记抗体用含PEG的稀释液稀释；第七是酶标板孔中加入稀释好的酶标记抗体温育；第八是取出酶标板，用PBS洗涤；最后加底物显色。本发明操作简便，敏感性特异性高，检测时间短，费用低。主要用于孕期风疹病毒感染的快速检测和流行病学调查。

主权项

1、一种快速检测风疹病毒抗体的酶免疫学方法，配制碳酸盐缓冲液，将1.59克碳酸钠和2.93克碳酸氢钠溶于1000毫升双蒸水中、风疹可溶性抗原用碳酸盐缓冲液以1∶200或1∶400或1∶800稀释后包被于96孔聚苯乙烯反应板，每孔加100微升，在4℃孵育过夜或37℃温育2～4小时，其特征在于：A、配制pH值9.6的磷酸盐缓冲液，将4.8克磷酸氢二钠加热溶解于适量双蒸水中，再加入4.3克磷酸二氢钾和68克氯化钠，搅拌混匀后，补足溶液总量至1000毫升；B、取上述磷酸盐缓冲液500ml，加入50微升的吐温-20，配成含1/1000吐温-20的磷酸盐缓冲液洗液；C、取磷酸盐缓冲液500ml，加入25ml的小牛血清和20克的聚乙二醇6000，配成含4％聚乙二醇的样本稀释液；D、甩去酶标板孔内的抗原溶液，用上述磷酸盐缓冲液洗液洗涤3～5次，每次3～5分钟；E、待测血清及阳性对照和阴性对照血清用含4％聚乙二醇的样本稀释液作1∶200或1∶100稀释后，于酶标板中每孔加入100ul，置湿盒中37℃作用5～30分钟，取出用磷酸盐缓冲液洗液洗涤，方法同上；F、将辣根过氧化物酶标记的羊抗人免疫球蛋白MIgM用含4％聚乙二醇的样本稀释液作1∶1000或1∶500或1∶2000稀释，每孔加入100ul，置湿盒中37℃作用5～30分钟；G、配制底物缓冲液，将3.4克乙酸钠和5.25克的柠檬酸加入500ml的双蒸水中混匀，调pH值至4.8；H、配制底物溶液，在10ml上述底物缓冲液中加入100ul1％的四甲基乙二胺和10ul双氧水混匀；I、取出酶标板，用磷酸盐缓冲液洗涤3次，方法同上，每孔加入100ul该混合物，置温盒中37℃作用5～15分钟，在酶标仪上读取波长为450纳米时的吸光度值或肉眼观察结果。