[发明专利]乙型肝炎病毒siRNA表达载体的构建以及抗病毒治疗应用无效
| 申请号： | 03117329.2 | 申请日： | 2003-02-20 |
| 公开（公告）号： | CN1523113A | 公开（公告）日： | 2004-08-25 |
| 发明（设计）人： | 黄爱龙;唐霓;张秉强;阎歌 | 申请（专利权）人： | 重庆医科大学 |
| 主分类号： | C12N15/86 | 分类号： | C12N15/86;C12N15/11;C12N5/10;A61K48/00 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 400010*** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | 乙型肝炎病毒siRNA表达载体的构建以及抗病毒治疗应用，本发明属基因工程技术领域。本发明根据siRNA的设计原则，分别选择HBV包膜蛋白(MS)编码区69nt－87nt，聚合酶(P)编码区708nt－726nt，核心蛋白(C)编码区2052nt－2070nt的核苷酸序列，设计相应的siRNA序列，用BLAST软件进行同源分析证实为HBV高度保守序列后，化学合成单链寡核苷酸，体外经退火形成双链DNA，与真核表达载体pTZU6+1连接，酶切鉴定和序列测定分析表明成功构建了三种靶向乙型肝炎病毒(HBV)基因序列的siRNA表达载体。上述表达载体通过阳离子脂质体介导与HBV真核表达载体pHBV共转染肝癌细胞HepG2后，采用免疫荧光和Abbott实验均证实HBV siRNA具有较强抑制病毒复制和表达的作用。 | ||
| 搜索关键词： | 乙型肝炎 病毒 sirna 表达 载体 构建 以及 抗病毒 治疗 应用 | ||
【主权项】：
1.构建三种靶向乙型肝炎病毒(HBV)基因序列的siRNA表达载体，其特征在于：本发明在构建针对HBV基因的siRNA表达载体时，根据siRNA的设计原则，分别选择HBV包膜蛋白(MS)编码区69nt-87nt，聚合酶(P)编码区708nt-726nt，核心蛋白(C)编码区2052nt-2070nt的核苷酸序列，设计相应的siRNA序列，用BLAST软件进行同源分析证实为HBV高度保守序列后，化学合成单链寡核苷酸，体外经退火形成双链DNA，与真核表达载体pTZU6+1连接，酶切鉴定和序列测定分析表明成功构建了三种靶向乙型肝炎病毒(HBV)基因序列的siRNA表达载体。
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