[发明专利]一种无需聚合酶链式反应的点突变方法及试剂盒无效
| 申请号： | 03104671.1 | 申请日： | 2003-02-21 |
| 公开（公告）号： | CN1519326A | 公开（公告）日： | 2004-08-11 |
| 发明（设计）人： | 黄大卫;辛文 | 申请（专利权）人： | 中国科学院动物研究所 |
| 主分类号： | C12P19/34 | 分类号： | C12P19/34;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京律诚同业知识产权代理有限公司 | 代理人： | 王凤华 |
| 地址： | 100080北京*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种无需聚合酶链式反应的点突变方法及其试剂盒。该方法先将质粒模板变性，含点突变的引物与模板退火；然后加入DNA聚合酶和DNA连接酶，用来合成突变链，并封闭切口；接着进行第二步变性，加入选择引物并与突变链退火；用聚合酶聚合，合成另一条突变链；最后在产物中加入DpnI限制性内切酶，消化去除非突变模板。该方法由于无需PCR，使得该突变过程高保真，不会引入其它额外的突变；并且该方法价格低廉，省时，快速，操作简单。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 无需 聚合 链式反应 突变 方法 试剂盒 | ||
【主权项】：
1.一种无需聚合酶链式反应的点突变方法，包括如下步骤：1)质粒模板变性，含点突变的引物与模板退火；2)加入DNA聚合酶和DNA连接酶，用来合成突变链，连接酶封闭突变链的切口；3)第二步变性，加入选择引物并与步骤2)得到的突变链退火，得到变性混合物；4)在步骤3)得到的变性混合物中加入DNA聚合酶，聚合得到另一条突变链；5)在步骤4)的产物中加入DpnI限制性内切酶，消化去除非突变模板。
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