[发明专利]总DNA导入培育富集重金属转基因植物的方法

摘要

本发明涉及一种利用总DNA导入技术培育富集重金属转基因植物的方法。选择已证实为重金属超富集植物作为供体植物，生物量大、生长快、适应性广的植物作为受体植物；用CTAB法提取供体植物的总DNA；用改进的总DNA导入技术将供体植物DNA导入到受体植物未成熟子房或种胚中，种子播种于含重金属达到抑制处理前原型植物生长的浓度的培养基或土壤中，筛选出富集重金属能力比转基因前原型植物提高5倍以上的植株确定为富集重金属的转基因植物。本发明方法简便易行，不受植物配子或细胞间亲和性影响，可以较低的成本和较快的速度获得更多更好的重金属富集或超富集植物。它将使得“用基因工程手段获得富集重金属的转基因植物”的设想得以实现。

主权项

1.一种总DNA导入培育富集重金属转基因植物的方法，其特征是包括以下步骤：(1)选择已证实为重金属超富集植物作为供体植物，选择生物量大、生长快、适应性广的植物作为受体植物；(2)用CTAB法提取超富集植物的总DNA。DNA溶于TE缓冲液；(3)用琼脂糖凝胶电泳观察DNA的提取效果，测OD260值并计算DNA浓度；(4)DNA经限制性内切酶部分消化或超声波轻微处理，使之显现10-50kb片段占主要成分；(5)用液体授粉法、花粉管通道法或/和子房注射法将DNA溶液注入受体植物未成熟子房，每种处理达到1000朵以上花，收获种子；或者用种胚注射法或/和浸种法，每种处理达到1000粒以上种子，种植并收获种子：每朵花或每粒种子注入DNA量1-10μg；(6)收获的种子，生长旺盛的植株进行转基因分析和重金属富集试验；转化率为0.1-1％；(7)对初选的转基因植株留种，进一步种植，观察测定重金属富集能力，用随机扩增片段多态性、蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳或/和特异DNA片段序列分析的分子生物学手段确定转化基因的存在、表达特性和遗传稳定性；(8)将上述转基因植物用于重金属污染土壤的植物修复试验，选择富集重金属能力比转基因前原型植物提高5倍以上，即富集Cd、Co、Cu、Ni、Pb达100μg/g植物干重以上，或者富集Mn、Zn、As达1000μg/g植物干重以上的植株即为富集重金属的转基因植物。