[发明专利]一种基因重组鲑鱼降钙素的制备工艺

摘要

本发明涉及一种基因重组鲑鱼降钙素(sCT)的制备工艺，是对原工艺作了许多重要改进，例如，使大肠杆菌基因表达的sCT前体C末端为亮氨酸，以便能使用CPD－Y进行C末端酰胺化；构建的融合表达载体转化由Ecoli.B衍生的大肠杆菌宿主，以避免表达的目的蛋白降解，提高融合蛋白产量等等。本发明方法工艺简单、成本低廉、生产周期短，且不会造成环境污染。

主权项

1.一种基因重组鲑鱼降钙素的制备工艺，包括：(1)构建含sCT前体cDNA融合表达载体pGEX-sCT前体的工程菌；(2)sCT工程菌的发酵；(3)分离、纯化sCT前体；(4)sCT前体的酰胺化及复性成为成熟sCT；(5)sCT活性的测定；其特征在于构建sCT前体基因时，首先按其氨基酸序列，用大肠杆菌的偏爱密码编码成若干DNA片段，并化学合成DNA片段，再拼接成sCT前体的全长cDNA，所拼接成的全长cDNAN端含蛋氨酸密码子，以便通过CNBr裂解产生与天然sCT完全相同的N端氨基酸序列，C末端为亮氨酸密码子，以便使由大肠杆菌表达出的产物，可用羧基肽酶Y进行C末端酰胺化。