[发明专利]基因重组制备人肌红蛋白的方法无效
| 申请号： | 02110359.3 | 申请日： | 2002-04-27 |
| 公开（公告）号： | CN1160464C | 公开（公告）日： | 2004-08-04 |
| 发明（设计）人： | 王桂琴;陈明;史沁卫 | 申请（专利权）人： | 王桂琴;陈明;史沁卫 |
| 主分类号： | C12N15/63 | 分类号： | C12N15/63;C12N15/70;C12N15/12;C12N1/21;C12Q1/68;C07K14/805 |
| 代理公司： | 山西太原科卫专利事务所 | 代理人： | 朱源 |
| 地址： | 030002山西省太原市*** | 国省代码： | 山西;14 |
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| 摘要： | 本发明为基因重组制备人肌红蛋白的方法，包括RT-PCR技术制备人肌红蛋白基因的过程、重组表达质粒的构建过程、重组表达质粒导入宿主大肠杆菌、纯化的目的基因在转化体表达的过程和表达产物纯化鉴定的过程，重组表达质粒所用的质粒为pET-21a(+)，所用的大肠杆菌选用BL21DE3菌株。该方法在插入基因片段两端设计了双酶切位点的人工接头，保证了正确的插入方向，使重组表达质粒的构建可一次完成，操作更快速、方便、简单，相对现有技术大大缩短了制备生产的时间；表达产物正确、特异、稳定、高效，纯化的人肌红蛋白能与抗人肌红蛋白单抗特异反应，证明纯化产物保持了其天然活性，因而，本发明为制备人肌红蛋白及其单抗奠定了基础。 | ||
| 搜索关键词： | 基因 重组 制备 肌红蛋白 方法 | ||
【主权项】：
1、一种基因重组制备人肌红蛋白的方法，包括从组织抽提总RNA、总RNA反转录成cDNA、加入上下游引物进行PCR扩增步骤的RT-PCR技术制备人肌红蛋白基因的过程、包括将所制备的人肌红蛋白基因片段、载体质粒双酶切、酶切产物纯化连接步骤的重组表达质粒的构建过程、重组表达质粒导入宿主大肠杆菌、纯化的目的基因在转化体表达的过程和表达产物纯化鉴定的过程，其特征为：其基因制备过程中的扩增参数为：变性：93-95℃1-3min，退火：60-68℃30-60s，延伸：68-72℃30-60s，该过程进行35次循环；重组表达质粒所用的质粒为pET-21a(+)；所用的宿主大肠杆菌选用BL21DE3菌株。
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