[发明专利]一种防治血栓性疾病的新的蛇毒类凝血酶结构及纯化

摘要

本发明公开了一种源于尖吻蝮蛇毒的防治血栓性疾病的新的类凝血酶(TLE)的N-端氨基酸序列及其纯化方法，该酶由两条相同的亚基组成，分子量为30298Da，最适pH为7.0～7.5，稳定pH为4.0～9.0，其N-端15个氨基酸残基序列为N-DSPSPWGWYDYDQYQ，能有效抑制大鼠动脉血栓的形成，并对家兔耳缘静脉血栓有明显的溶栓作用。

主权项

1、一种源于尖吻蝮蛇的防治血栓性疾病的类凝血酶，N-末端氨基酸残基的排列顺序为N-DSPSPWGWYDYDQYQ，由两条相同的亚基组成，分子量为30298Da，最适pH为7.0～7.5，稳定pH为4.0～9.0，可用主要包括依次进行的下述柱层析方法得到：(1)DEAE柱层析，层析条件为：流动相A为0.01～0.02mol/L，pH8.2～8.8的Tris-HCl缓冲液，B为含1mol/LNaCl的A液，流速为3ml/min，采用二元梯度洗脱，或者层析条件为：流动相A为0.01～0.02mol/L，pH7.2～7.8的Tris-HCl缓冲液，B为含1mol/LNaCl的A液，流速为3ml/min，采用二元梯度洗脱，(2)经Mono Q柱层析，或者SOURCE Q柱层析纯化；MonoQ柱层析条件为：流动相A为0.01～0.02mol/L，pH7.8～8.2的Tris-HCl缓冲液，B为含1mol/LNaCl的A液，流速：1ml/min，采用二元梯度洗脱，SOURCEQ柱层析条件为：流动相A为0.01～0.02mol/L，pH7.8～8.2的Tris-HCl缓冲液，B为含0.3mol/LNaCl的A液，流速：3ml/min，采用二元梯度洗脱，(3)经RESOURCE RPC柱纯化，层析条件为：流动相A为含0.1％TFA的水溶液，B为含0.1％TFA的乙腈溶液，流速为3ml/min采用二元梯度洗脱，