[发明专利]用凝胶层析从发酵液中提取重组人表皮生长因子的方法

摘要

本发明公开了一种用凝胶层析从发酵液中提取重组人表皮生长因子的方法。它的提取步骤如下，发酵液预制备：取除去菌体的发酵上清液，经盐析、溶解、离心，人表皮生长因子进入上清液中；人表皮生长因子的凝胶分离：用层析系统将上清液加到凝胶层析柱中，然后洗脱直至出峰完毕，收集洗脱液；人表皮生长因子的冷冻升华干燥：将收集液于-40℃下冷冻升华干燥，即可。本发明具有过程集成、工艺简单、生产周期短、操作方便、成本低、条件温和与见效快等优点。

主权项

1.一种用凝胶层析从发酵液中提取重组人表皮生长因子的方法，其特征在 于它的提取步骤如下： 1)发酵液预制备 取除去菌体的发酵上清液1000ml，发酵液中人表皮生长因子浓度为100～ 300mg/l，加入350～450g硫酸铵，搅拌至溶解，0～4℃下静置4～24小时，至 沉淀彻底，人表皮生长因子进入沉淀中，虹吸去除700～850ml上清液，剩余的 150～300ml经过10000rpm、30min离心，用50ml蒸馏水或0.02M磷酸缓冲液搅 拌溶解沉淀，形成悬浊液，0～4℃下静置4～24小时，待溶解充分后，经过 10000rpm、30min离心，收集上清液，人表皮生长因子进入上清液中； 2)人表皮生长因子的凝胶分离 用层析系统，将1～2.5ml粗制发酵上清液用蠕动泵以3～9cm/h的线速度加 到SephadexG-50Superfine凝胶层析柱中，然后将蒸馏水用蠕动泵以3～9cm/h 的线速度进行洗脱直至出峰完毕，用紫外检测仪在波长280nm下进行检测，并加 以记录，收集保留体积为18.2～19.7ml处的第二个峰的洗脱液，收集体积为3～ 5ml； 3)人表皮生长因子的冷冻升华干燥 将收集液于-40℃下冷冻升华干燥，得白色干粉状人表皮生长因子。