[发明专利]多元醇干扰素β偶联物

说明书

相关申请的交叉引用

本申请根据35 U.S.C.§119(e)要求美国临时申请号60/083,339的优先权，其全部内容在此纳入以供参考。

发明领域

本发明涉及多元醇-IFN-β偶联物，其中多元醇单元和Cys¹⁷共价结合。本发明的另一个目的是其位点特异性产生的过程以及其在细菌感染、病毒感染、自身免疫疾病和炎症疾病中治疗、预后或诊断中的用途。本发明还涉及两个或多个PEG分子分步结合到多肽上的方法。

发明背景

人成纤维细胞干扰素(IFN-β)具有抗病毒活性而且也能刺激针对致瘤性细胞的自然杀伤细胞。它是由病毒和双链RNA诱导的约20,000Da的多肽。Derynk等(自然，285:542-547,1980)用重组DNA技术克隆的成纤维细胞基因的核苷酸序列推出了该蛋白质的完整氨基酸序列。它长166个氨基酸。

Shepard等(自然，294:536-565,1981)描述了842位的碱基突变能消除其抗病毒活性(位点141Cys→Tyr)，以及具有1119-1121核苷酸缺失的变异克隆。

Mark等(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,81(18):5662-5666,1984)通过用(A)置换469(T)碱基，导致在位点17从Cys→Ser的氨基酸转变，插入了一个人工突变。报道了得到的IFN-β与“天然”IFN-β活性相同，并且在长期储藏(-70℃)中保持稳定。

将亲水性多聚物聚乙二醇(PEG)(也称作聚环氧乙烷)与分子共价结合是生物技术和医学上的重要应用。PEG在其最常见形式下是在各末端具有羟基基团的线性多聚物：

HO-CH₂-CH₂O(CH₂CH₂O)_nCH₂CH₂-OH该分子式能简单的代表为HO-PEG-OH，其中指-PEG-代表没有末端基团的多聚物主链：

“-PEG-”指“-CH₂CH₂O(CH₂CH₂O)_nCH₂CH₂-

PEG通常用作甲氧基-PEG-OH，其中一个末端是相对惰性的甲氧基基团，而另一个末端是要化学修饰的羟基基团。

CH₃O-(CH₂CH₂O)_n-CH₂CH₂-OH

也常用支链PEG。支链PEG可以表示成R(-PEG-OH)_m，其中R代表例如季戊二醇或丙三醇的中央核心分子，而m代表支化臂的数目。支化臂的数目(m)能从三变化到100或更多。羟基基团要进行化学修饰。

其它如PCT专利申请WO 96/21469所述的支链形式具有要进行化学修饰的单个末端。这种PEG类型能表示成(CH₃O-PEG-)_pR-X，其中p等于2或3，R代表例如赖氨酸或丙三醇的中央核心，而X代表如能进行化学活化的羧基的功能性基团。而另一个支链形式，“侧基PEG”具有如羧基(其主要在PEG主链上而不是在PEG链末端)的反应性基团。

除了PEG的这些形式，也能用在主链中的弱键或可降解键来制备多聚物。例如，Harris已在美国专利申请06/026,716中显示能用多聚物主链中可进行水解的酯键来制备PEG。该水解(反应)导致多聚物被切成较小分子量的片段，根据反应流程：       

根据本发明，术语聚乙二醇或PEG指包括所有上述衍生物。

环氧乙烷和环氧丙烷的共多聚物在其化学上和PEG密切相关，而且它们能用来代替PEG的许多应用。它们具有以下通式：        HO-CH₂CHRO(CH₂CHRO)_nCH₂CHR-OH其中R是H或CH₃。