[发明专利]具有类甾族化合物结构的物质、其制造方法和含有该物质的抗肿瘤剂

说明书

技术领域

本发明涉及从冬虫夏草中分离具有抗肿瘤活性的活性馏分和其中所含活性成分的方法以及该活性成分的化学结构。并且涉及含有该活性馏分或活性成分的抗肿瘤剂。

背景技术

冬虫夏草是一种子实体，它寄生于蝶蛾类鳞翅目和鞘翅目的昆虫或其幼虫体内，在它们的体内形成菌核，然后在夏季形成于作为宿主的昆虫或其幼虫的虫体表面上。已知在世界上的冬虫夏草约有350种，自古已知，冬虫夏草对人体完全没有毒性并且显示各种各样的效果，因此它是一种可作为中药经口服用的物质，今日在中国已将冬虫夏草录载于作为与中药有关的书刊的“中草药学”或“中药大辞典”等书刊中，即使在日本也已将冬虫夏草记载入“新订和汉药”及其他许多中文书籍中。

作为记载于各种书籍中的药理作用，冬虫夏草具有增强精力、滋养强壮、治疗循环器官系统疾病(日本药理学会志，67卷，213页，1995年)、糖尿病[Biol．Pharm．Bull16卷，1291-1293页(1993)；同一杂志，19卷，294-296页(1996)]、肝病[Prog．Med12卷，1172-1174(1992)]等效果。另外，通过近年来的药理学研究证实，冬虫夏草真菌在许多方面具有活性和药理作用，还报导了它的抗肿瘤和免疫增强作用等[《日本免疫学会学术记录》18卷，665页(1988年)；《日本细菌学会志》45卷，763页(1990年)；J．Kanazawa《Med．Univ》17卷，330-335页(1992)]。

然而，对完全纯化的冬虫夏草的活性成分进行的研究和在临床上应用的例子却很少[J．Am．Pharm．Ass46，114-118(1957)；特开平8-81386号公报]，因此，在把未经纯化的提取物用于投药时，必须使用较多量的冬虫夏草原未或锭剂，这是存在的问题，另外，在药理作用的均一性和可靠性方面也存在问题。另外，关于从冬虫夏草提取的活性物质的分类或限定以及其药理作用的机制方面的研究几乎未见报导，即使在已被确认具有最多种类冬虫夏草生长的以中国为首的亚洲诸国中，冬虫夏草也是被作为葛根汤等汤剂处方中的药草煎汤服用，只是根据不同地区的习惯和信仰有不同的服用方式，这是目前的现状，在此情况下不能达到确实地维持稳定的药理效果的目的。

因此，为了能够确实而且有效地利用冬虫夏草的药理作用，特别是其抗肿瘤和增强免疫力等药理效果，人们强烈地希望开发一种用于从冬虫夏草的成分中分离出具有上述活性的活性成分的分离方法。

发明内容

本发明着眼于冬虫夏草所具有的抗肿瘤效果，其目的是提供一种能够以纯品状态获得具有上述效果的化合物的分离方法。另外，本发明的另一个目的是提供一种具有上述抗肿瘤效果的化合物。进而，本发明的再一个目的是提供一种含有上述化合物的抗肿瘤剂。

对附图的简单说明

图1A是本发明用于从冬虫夏草中提取活性馏分和活性成分的一般流程图。

图1B是在实施例1中使用的本发明从冬虫夏草中提取活性馏分和活性成分的流程图。

图2是色谱图，其中示出了在实施列1中获得的按本发明分离纯化的化合物(Ⅱ)的反相色谱。箭头所指处是化合物(Ⅱ)的峰。其中示出的保持时间是以样品注入时间作为0分测得的时间。

图3是质谱图，其中示出了在实施例1中获得的作为本发明活性成分的化合物(Ⅱ)的质谱数据。

图4是表示本发明的活性馏分(图1B的C5馏分)对细胞增殖的抑制作用(浓度相关性)的曲线图。图中分别示出了在使用纤维芽细胞(以○表示)和Hela细胞(以●表示)时的结果。

图5表示按照本发明方法分离、提取的各馏分(图1B的C1～C10馏分)对Vero细胞所起的细胞增殖抑制作用。

图6表示按照本发明方法分离、提取的各馏分(图1B的C1～C10馏分)对Hela细胞所起的细胞增殖抑制作用。

图7是照片，其中示出了DNA碎裂的结果和Hela细胞内的染色质凝聚(24小时)的情况。

图8是照片，其中示出了DNA碎裂的结果和Hela细胞内的染色质凝聚(72小时)的情况。

图9是表示Hela细胞DNA的电泳结果的照片。其中，泳道1～4表示在24小时之后的结果，泳道5～8表示在48小时后的结果，泳道9～12表示在72小时后的结果。M和数字分别表示分子量标记和标记用分子量。

用于实施发明的最佳实施方案