[发明专利]转人内皮抑素(Endostatin)基因乳酸菌的方法、产品及其应用

权利要求书

1、一种转人内皮抑素(Endostatin)基因乳酸菌的方法，其特征是：

a：按常规方法，将专利申请号为97107112．8中的人Endostatin基因经酶切转移到具有原核表达元件的质粒载体中，对含这种转化载体的基因质粒菌株进行扩增，并从中提取纯化制得含人Endostatin基因的质粒载体；

b：将作为受体的乳酸菌类菌株、如乳酸杆菌、双歧杆菌如乳酸链球菌培养到对数生长期，分别制得便于接受外源基因的乳酸菌类受体。采用适合于原核表达元件的改进的基因质粒转化方法——PEG法、氯化钙法及其它常规转化方法，用a所述的质粒载体对乳酸菌类菌株受体进行转化处理。经上述转化处理的乳酸菌类菌株经复苏培养后，涂布于含有青霉素的常规固体培养基平板上培养48-84小时，然后挑取单菌落培养于常规液体培养基中扩增培养，再扩增培养至继代培养不低于30代。

2、一种转人内皮抑素(Endostatin)基因乳酸菌，其特征是有氧培养下的转人Endostatin基因乳酸杆菌和厌氧培养下的转人Endostatin基因双歧杆菌分别扩增培养后，经冻干成菌粉，分别计数活菌数后，以活菌数不同比例混合，可按0-50％的转基因乳酸杆菌和100％-50％的转基因双歧杆菌冻干菌粉混合后，根据最终产品活菌数的要求加入赋型剂脱脂奶粉和1-5％的低聚糖，制备成转基因乳酸菌口服制剂。

3、根据权利要求2所述的转人内皮抑素(Endostatin)基因乳酸菌，其特征是在转基因乳酸杆菌和转基因双歧杆菌混合菌粉中再加入0％-50％的转人Endostatin基因乳酸链球菌冻干粉制备成含三种复合转基因菌的转基因乳酸菌类口服制剂。

4、一种转人内皮抑素(Endostatin)基因乳酸菌口服制剂，其特征是用于治疗由血管生成介导性、依赖性或相关性的疾病和过程以及治疗内皮细胞的过量刺激或异常刺激引起的疾病。