[发明专利]一种新的人基因编码序列、其编码的多肽及制法

说明书

本发明涉及基因工程领域，具体地，本发明涉及一种新的人基因核苷酸序列。更具体地说，本发明涉及人HnudC的cDNA序列，该序列的编码蛋白是大鼠RnudC的同系物。本发明还涉及由该核苷酸序列编码的多肽，这些多核苷酸和多肽的应用，以及所述多核苷酸和所述多肽的生产方法。

nudC、nudA、nudF、RnudC和DnudC是在构巢曲霉(Aspergillus nidulans)大鼠及果蝇中发现的几个基因，它们被认为与细胞器正确定位、细胞内物质小泡转运及细胞核的运动等作用有关。在高等生物体内，催乳素(PRL)调节着淋巴细胞的增殖、活化及衰亡。而PRL对淋巴细胞的调节作用主要是从激活大量T淋巴细胞的早期表达基因开始的。这些基因包括干扰素调节因子-1、PRL-受体、鸟氨酸脱羧酶、c-myc、nud等。研究发现，nudC、RnudC和DnudC在结构和功能上都高度保守，nudC调节着细胞内物质小泡转运及细胞核运动。细胞内物质的小泡转运对于细胞内蛋白分泌与运输，细胞的分化生长起着重要的作用。nudC在生物体内与动力蛋白及动力蛋白激活蛋白复合物相互作用，从而使得细胞核与微管系统偶联，产生正常的细胞核运动(MolecularEndocrinology，1995，9(3)，312-318)

nudC基因在各种不同的细胞类型与种群中都广泛存在，如在纤维细胞和神经细胞中。nudC最早是从构巢曲霉中发现的一个基因。它是由Osmani A.H.等人于1990年从构巢曲霉cDNA文库中克隆得到的一个基因(J Cell Biol.1990，111：543-551)，它与以后在大鼠及果蝇中分别发现的基因RnudC和DnudC具有较高的同源性并具有相似的功能。DnudC是于1997年由Cunniff J.等人从果蝇中克隆的(Mech De 1997，66(1-2)：55-68)。其后不久，Shelli M等人从大鼠中分离得到了RnudC基因(Exp.Cell.Res 1998，238，23-32)。研究发现，这些基因不仅在结构上高度保守，而且在功能上也高度保守。

本发明的一个目的是提供一种新的多核苷酸序列，该多核苷酸序列编码人的一种与大鼠RnudC同源的蛋白，本发明的与大鼠RnudC同源的人基因被命名为HnudC。

本发明的另一个目的是提供一种新的蛋白，该蛋白被命名为HnudC蛋白。

本发明的再一个目的是提供一种利用重组技术生产所述的新的人HnudC蛋白的方法。

本发明还提供了这种人HnudC核苷酸序列和蛋白的应用。

在本发明的一个方面，提供了一种分离出的DNA分子，它包括：编码具有人HnudC蛋白活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.3中从核苷酸43-1038位的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度严紧条件下与SEQ ID NO.3中从核苷酸43-1038位的核苷酸序列杂交。较佳地，所述的序列编码一多肽，该多肽具有SEQ ID NO.4所示的序列。更佳地，该序列具有SEQ ID NO.3中43-1038位的核苷酸序列。

在本发明的另一方面，提供了一种分离的HnudC蛋白多肽，它包括：具有SEQ IDNO.4氨基酸序列的多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO.4序列的多肽。

在本发明的另一方面，提供了一种载体，它含有上述分离出的DNA。

在本发明的另一方面，提供了一种所述载体转化的宿主细胞。

在本发明的另一方面，提供了一种产生具有HnudC蛋白活性的多肽的方法，该方法包括：

(a)将编码具有HnudC蛋白活性的多肽的核苷酸序列可操作地连于表达调控序列，形成HnudC蛋白表达载体，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.3中从核苷酸43-1038位的核苷酸序列有至少70％的同源性；

(b)将步骤(a)中的表达载体转入宿主细胞，形成HnudC蛋白的重组细胞；

(c)在适合表达HnudC蛋白多肽的条件下，培养步骤(b)中的重组细胞；

(d)分离出具有HnudC蛋白活性的多肽。

在本发明的一个具体实施方案中，本发明的分离的多核苷酸全长为1091个核苷酸，其详细序列见SEQ ID NO.3，其中开放读框位于43-1038位核苷酸。

在本发明中，“分离的”、“纯化的”或“基本纯的”DNA是指，该DNA或片段已从天然状态下位于其两侧的序列中分离出来，还指该DNA或片段已经与天然状态下伴随核酸的组份分开，而且已经与在细胞中伴随其的蛋白质分开。