[发明专利]同时含有乙肝病毒和丙肝病毒核心抗原的双重抗原

说明书

本发明涉及利用基因重组技术获得的肝炎病毒抗原，尤指乙肝病毒核心抗原和丙肝病毒核心蛋白基因的融合克隆，并表达获得的双重抗原。

现已查明丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus，HCV)是引起输血后传染的非甲非乙肝炎的主要病原体。据统计，目前世界人口的1％已被HCV所感染，其中的25％为急性感染并出现黄疸，而其中的一半则将可能发展成慢性肝炎。而慢性感染者将发展演变为肝硬化和肝癌的可能性高达20％，因此危害性很大。同时，在世界范围内有3亿人口已被乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)所感染，如果不作适当预防和治疗可能会有1.4亿感染者将死于乙肝，同样，危害性也是十分大的。因此乙肝和丙肝的预防和治疗仍然是目前各国学者急待研究解决的重大课题。

研制乙型肝炎疫苗、预防接种乙肝疫苗是目前预防乙肝流行的根本途径。同时应用疫苗于慢性乙肝的治疗方面当今已显露出一些可喜的结果。乙肝疫苗已由应用血源疫苗发展到基因工程重组乙肝表面抗原疫苗。而新型基因工程疫苗，即带多重免疫决定簇的基因工程表面抗原疫苗也正在研制中。

近来研究表明，乙肝病毒核心抗原(HBcAg)在原核和真核表达系统中均能自行组装成直径为27nm的颗粒(Pasek,M.等,Nature 1979,282,575；Roossinck,M.J.等，Mol.Cell.Biol.1986,6,1393)。颗粒具有良好的免疫原性和稳定性，在体内能诱导产生依赖T细胞和不依赖T细胞的高滴度的抗体(Milich,D.R.等，Science 1986,234,1398)。利用乙肝核心抗原为免疫载体蛋白在合适的位点融合外源片段已有一些成功的例子，如口蹄疫病毒(Clake,B.E.等，Nature 1987,330,381；Beeretag,K.M.等，Bio/Technology 1990,8,644)，脊髓灰质炎病毒(Clake,B.E.等，J.Gen.Virol.1990,71,1109)，乙肝病毒preSl(Schodel,F.等，J.Viro1.1992,66,106)等等。他们发现HBcAg在外源片段融合后仍能形成颗粒，被融合片段的免疫原性有一定的提高。

HCV研究由于起步较晚，目前尚未有合适的体外培养增殖系统，还不能直接研究其病毒蛋白。又由于HCV基因型变异多，而至今其保护性抗原尚未精确定位，因而目前HCV疫苗的研制仍未有重大突破。为防止HCV的传播，应加强对HCV感染的临床诊断和血源的检测。研制HCV疫苗、发展HCV的检测技术显得尤为重要。

大量的研究者报道，不同来源的HCV核心蛋白基因被认为是最为保守的区域，且受感染人群大多数都有核心蛋白抗体。HCV核心蛋白在HCV预防和治疗中的作用受到人们的重视，但如何获得具有良好免疫原性的HCV核心蛋白的问题尚未得到解决。各种表达体系中尚未成功地发现所获得的HCV全核心蛋白形成颗粒结构。

为此，本发明的目的是提供一种同时含有乙型肝炎病毒核心抗原与丙型肝炎病毒核心蛋白的双重抗原。该抗原是颗粒状融合蛋白，可通过一个含有HBcAg主要抗原决定簇基因(对应于1-144位氨基酸的乙肝病毒核心抗原基因)与HCV核心蛋白主要抗原决定簇基因(对应于1-69位氨基酸或1-40位氨基酸的丙肝病毒核心蛋白基因)的融合，再通过融合基因在大肠杆菌系统中表达后获得。

本发明是一种同时含有乙肝病毒和丙肝病毒核心抗原的双重抗原，该抗原是通过融合基因表达获得的具有双重抗原的融合蛋白颗粒，所述融合基因是乙肝病毒核心抗原中去除羧端精氨酸富集区后的主要抗原决定簇基因即对应于1-144位氨基酸的乙肝病毒核心抗原基因与丙肝病毒核心蛋白主要抗原决定簇基因即与对应于1-69位氨基酸或1-40位氨基酸的丙肝病毒核心蛋白基因的融合。