[发明专利]被二噁英样化合物转化的Ah受体的免疫测定

说明书

发明领域

本发明涉及检测转化的Ah受体，以及随后通过检测转化的Ah受体而间接检测二噁英样化合物。

发明背景

导言

在最近的数十年里，二噁英已成为详细研究的热门课题。这归因于它们很大的毒性，以及据推测它们在环境中广泛的存在。对二噁英的毒理学研究主要集中在通过采用动物模型和细胞培养体系对它们的生物学活性进行研究。此外，二噁英对人类健康的潜在威胁还仅是通过对已知暴露于二噁英的人群进行流行病学研究的有限方法进行。从环境角度着眼于研究二噁英的产生、释放和降解。尽管在这些方面二噁英得到了广泛的研究，然而它们对生物系统的毒性的确切机制以及它们在环境中的分布范围尚不知晓。这部分是由于缺少评估生物系统暴露于二噁英及其相关化合物的简单方法。本发明的目的是克服本领域的这种缺陷。

环境中的TCDD及其相关化学制品

术语二噁英，通常为新闻媒体所采用，是2，3，7，8-四氯二苯并-对-二噁英(″TCDD″)的缩写。TCDD仅仅是多氯化的二苯并-对-二噁英家族中的一员(即同类物)，而该家族具有75种可能的同类物，其结构随着氯原子的数目和位置而变化。引起混淆的来源是术语″二噁英″一词或者被用于专指TCDD，或者用于指整个多氯二苯并二噁英(PCDD)家族。从生物学上来讲，TCDD是最强的PCDD；多数其它的PCDD活性要弱10到上千倍。TCDD在所有PCDD同类物中是研究得最为深入的一种。

一些芳香烃同TCDD具有相同的生物学特性，尤其是当其侧向位置被氯所取代时。这些化合物中最为重要的是多氯二苯并呋喃(″PCDF″)和某些多氯联苯家族(″PCB″)的成员。可能数目很大的PCDD(75)、PCDF(135)和PCB(20)的同类物使得环境分析变得复杂了，并且在能够采取此类分析前需要进行复杂的清除程序。在此所使用的″二噁英样化合物″包括所有上述所定义化合物家族的成员以及其它诱导相似细胞效应的化合物，例如偶氮苯和苯并芘。使用2，4，5-三氯苯氧基乙酸和2，4-二氯苯氧基乙酸脱叶剂，特别是通过在美国和越南所进行的森林喷洒计划，TCDD作为其产生的一种污染物在本世纪70年代早期引起了科学界和公众的注意。

现有的TCDD检测技术

在过去十年中检测二噁英样化合物的主要方法涉及使用物理-化学分析。这类方法通常包括一步或多步样品清除步骤以便从原始样本中提取出分析物，经气相色谱从与其它化合物的混合物中分离出感兴趣的分析物，通过质谱进行检测，并且与已知的合成标准物比较对分析物进行鉴定。这些步骤在R．E．Clement的“超痕量二噁英和二苯并呋喃分析：30年来的进展”，分析化学，Vol．63，no．23(1991)和分析新闻(Sept／Oct 1992)中得到了综述。尽管很灵敏，但由于其高昂的价格(即每个样品达到2500美元)以及需要在中心实验室由熟练的操作者进行分析，这些技术并不适合筛选大批量的样品。此外，对二噁英样化合物进行物理-化学分析并不适合对含二噁英样化合物的混合物进行毒性预测，或对尚没有合成标准物存在的二噁英样化合物进行鉴定。

另一种检测二噁英样化合物的方法是采用生物检测，即对活细胞或动物给予检测样品，然后分析细胞色素P450IA1活性的诱导-这种特性据认为可提示二噁英样化合物的存在。

一系列的文献都公开了细胞系生物检测的方法。在D．E．Tillitt等“H4IIE大鼠肝癌细胞生物检测作为评估环境样品中平面卤化烃毒性强度的手段的特征”，环境科学技术，Vol 25，no．1，pp．87-92(1991)中，利用H4IIE大鼠肝癌细胞全面评估不同二噁英样化合物的毒性强度。当这种细胞被检测样品处理后，它们被采取分光荧光分析来检测芳香烃羟化酶和乙氧基试卤灵-正-脱乙基酶活性(细胞色素P450IA1诱导的指示物)。T．Zacharewski，“体外应用芳香烃羟化酶诱导分析法确定‘2，3，7，8-四氯二苯并-对-二噁英的等价物’；被热解的溴化阻燃剂，”毒理学，51∶177-89(1986)(″Zacharewski″)总的来说与之相似。

还采用了需要利用活动物的生物检测。在Zacharewski，大鼠注射检测样品并被处死。回收肝脏微粒酶部分，然后进行酶分析以检测芳香烃羟化酶或乙氧基试卤灵-正-脱乙基酶的诱导。

虽然在文献中生物检测法已经被广泛地应用，它们却没得到实际的商业应用。这种方法主要的不足是需要活的细胞或动物，使它们不适合于采用商业检测试剂盒的方式。此外，P450IA1的酶检测法不是很灵敏而且需要复杂的仪器设备。