[发明专利]新型蛋白激酶NPK-110

权利要求书

1.一种DNA序列，它编码一种能够将tau、MAP4，MAP2和MAP2c里的KXGS基序磷酸化的神经元蛋白激酶(NPK)或其功能性片段，其特征在于具有以下特点：

(a)它能编码表6中的MARK-1所示的氨基酸序列；

(b)它能编码表6中的MARK-2所示的氨基酸序列；或

(c)它能与(a)或(b)的DNA杂交。    

2.如权利要求1的DNA序列，其中所述NPK的特征还在于具有如下特点：

(a)通过SDS-PAGE测得其表观分子量为110KD；

(b)它能将人tau蛋白的丝氨酸残基262、293、305、324和356磷酸化；和

(c)它包括以下氨基酸序列：

           KLDTFCGSPPYAAPELFQGK

           DRWMNVGHEEEELKPYAEP

           (K)SSRQNIPRCRNNI

3.如权利要求1或2的DNA序列，其中，所述NPK的特征还在于具有如下特点：

(d)它能被磷酸酶PP-2A失活；和

(e)它能将与tau有关的微管相关蛋白(MAPs)MAP2、MAP2c和MAP4的下列丝氨酸或苏氨酸残基磷酸化：

MAP2/MAP2c：S37、S1536、S1676、S1707、S1792、S1796、S1799

MAP4：T829、T873、T874、T876、S899、S903、S928、S941、S1073

(f)它能导致tau、MAP4、MAP2和MAP2c与微管解离。

4.如权利要求1-3中任一项的DNA序列，其中所述NPK可通过以下步骤从脑组织中获得：

(a)对脑提取物进行匀浆，随后进行离心处理；

(b)在磷酸纤维素上对在步骤(a)中所获得的上清液进行层析，其中，NPK活性级分由200～400mM NaCl洗脱；

(c)用硫酸铵来沉淀在步骤(b)所获得的活性级分，并对沉淀进行透析；

(d)在Q-Sepharose(Pharmacia)上对步骤(c)中获得的透析液进行阴离子交换层析，并洗脱NPK活性级分，其中，所述NPK活性级分以单峰形式由大约0.2M NaCl洗脱，随后对活性级分进行透析；

(e)在Mono S HR10/10(Pharmacia)上进行阳离子交换层析；

(f)在Mono Q HR5/5上进行层析，其中，NPK活性级分由大约250mM NaCl洗脱；

(g)在Superdex G-200上进行凝胶过滤层析，其中，NPK活性洗脱物的表观分子量为100kD；和

(h)在ATP-纤维素上进行亲和层析，其中，被洗脱的NPK活性级分的表观分子量经SDS-PAGE测定为大约110kD；其中，NPK活性是这样测定的：在存在放射性标记的ATP的条件下，温育一种包括人成熟tau的255～267氨基酸残基的肽，并测定掺入该肽中的放射性活性。

5.如权利要求1-4中任一项所述的DNA序列，其特征在于所述NPK是获自哺乳动物脑的NPK。

6.如权利要求5的DNA，其中所述哺乳动物脑是人或猪脑。

7.一种由权利要求1-6中任一项的DNA序列编码的多肽或其功能片段。

8.一种被权利要求7的多肽磷酸化的丝氨酸或苏氨酸残基，所述丝氨酸或苏氨酸残基位于与tau相关的微管相关蛋白(MAPs)MAP2、MAP2c和MAP4的下列氨基酸位置：

MAP2/MAP2c：S37、S1536、S1676、S1707、S1792、S1796、S1799

MAP4：T829、T873、T874、T876、S899、S903、S928、S941、S1073

9.一种包括权利要求8的丝氨酸或苏氨酸残基的表位。

10.一种特异性结合权利要求7的多肽或其片段的抗体.

11.一种特异性结合权利要求9的表位的抗体。

12.如权利要求10或11的抗体，它是一种单克隆抗体或其衍生物或片段。