[发明专利]非毒性、非产毒性、非致病性镰孢属表达系统及所用启动子和终止子

权利要求书

1.一种非毒性、非产毒性、非致病性重组镰孢属(Fusarium)宿主细胞，它包括一个与一个启动子可操纵连接的编码一种异源蛋白的核酸序列。

2.如权利要求1的宿主细胞，其中，所述镰孢菌是禾本科镰孢(Fusarium graminearum)。

3.如权利要求1的宿主细胞，其中，所述禾本科镰孢具有ATCC20334的鉴定特征。

4.如权利要求1的宿主细胞，其中，所述异源蛋白是一种真菌蛋白。

5.如权利要求1的宿主细胞，其中，所述异源蛋白是一种分泌性蛋白。

6.如权利要求1的宿主细胞，其中，所述异源蛋白是一种真菌酶。

7.如权利要求6的宿主细胞，其中，所述真菌酶选自过氧化氢酶、漆酶、酚氧化酶、氧化酶、氧化还原酶、纤维素酶、木聚糖酶、过氧化物酶、脂肪酶、水解酶、酯酶、角质酶、一种蛋白酶、氨肽酶、羧肽酶、肌醇六磷酸酶、裂合酶、溶果胶酶、淀粉酶、葡糖淀粉酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、α-葡糖苷酶、β-葡糖苷酶、甘露糖苷酶、异构酶、转化酶、转移酶、核糖核酸酶、壳多糖酶和脱氧核糖核酸酶。

8.如权利要求6的宿主细胞，其中，所述真菌酶是一种蛋白酶。

9.如权利要求6的宿主细胞，其中，所述真菌酶是一种碱性蛋白酶。

10.如权利要求9的宿主细胞，其中，所述碱性蛋白酶是尖镰孢(Fusarium oxysporum)类胰蛋白酶蛋白酶。

11.如权利要求10的宿主细胞，其中，所述尖镰孢类胰蛋白酶蛋白酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。

12.如权利要求6的宿主细胞，其中，所述真菌酶是一种内切葡聚糖酶或其变体。

13.如权利要求14的宿主细胞，其中，所述内切葡聚糖酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示。

14.如权利要求6的宿主细胞，其中，所述真菌酶是1，3脂肪酶或其变体。

15.如权利要求12的宿主细胞，其中，所述1，3脂肪酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：10所示。

16.如权利要求1的宿主细胞，其中，所述异源蛋白选自激素，生长因子和受体。

17.如权利要求1的宿主细胞，其中，所述启动子是一种真菌启动子。

18.如权利要求17的宿主细胞，其中，所述启动子选自来自构巢曲霉(A.nidulans)amdS的启动子。

19.如权利要求17的宿主细胞，其中，所述真菌启动子来自一个编码尖镰孢类胰蛋白酶蛋白酶的基因或其片段，该片段具有基本上与所述序列相同的启动子活性。

20.如权利要求19的宿主细胞，其中，所述启动子序列如SEQ IDNO：5所示。

21.如权利要求1的宿主细胞，它还包括一个选择标记。

22.如权利要求13的宿主细胞，其中，所述标记选自arg B、trpC、pyrG、amdS、niaD和hygB。

23.如权利要求1的宿主细胞，它还包括一个终止子。

24.如权利要求23的宿主细胞，其中，所述终止子来自一个编码尖镰孢类胰蛋白酶蛋白酶的基因或其片段，该片段具有基本上与所述序列相同的终止子活性。

25.如权利要求24的宿主细胞，其中，所述终止子序列如SEQ IDNO：6所示。

26.一种生产目的蛋白质的方法，它包括培养一种非毒性、非产毒性、非致病性重组镰孢属宿主细胞，该宿主细胞包括一个与一个启动子可操纵连接的编码所述蛋白质的核酸序列，以及分离所述蛋白质。

27.一种来自一个编码尖镰孢类胰蛋白酶蛋白酶的基因或其片段的启动子序列，所述片段具有基本上与所述序列相同的启动子活性，其中，该启动子的序列如SEQ ID NO：5所示。

28.一种来自一个编码尖镰孢类胰蛋白酶蛋白酶的基因或其片段的终止子序列，所述片段具有基本上与所述序列相同的终止子活性，其中，该终止子的序列如SEQ ID NO：6所示。