[发明专利]利心康

说明书

本发明涉及的是一种心肌细胞生长刺激肽(CMGSP)，临床应用于心肌炎和心脏外科手术后的恢复治疗。

现有技术中具有刺激心肌细胞DNA和蛋白的合成，促进细胞分裂增殖的刺激因子，主要是从自发性高血压大鼠或实验性高血压动物的心肌中提取，生物活性较低。

本发明的目的在于提供一种从健康幼年哺乳类动物的心肌中提取出的具有较高生物活性的心肌细胞生长刺激肽(CMGSP)，供临床上用于治疗心肌疾病和心脏外科手术后的恢复治疗。可口服和肌肉注射，或与其它药物配伍静脉。

本发明利心康药物是一种稳定的心肌细胞生长刺激肽(CMGSP)，具有如下特征：

(1)在PH2--9范围内稳定；

(2)加热95--100℃10分钟，60--70℃30分钟条件下生物活性不改变；

(3)在多种蛋白水解酶，37℃，2小时条件下生物活性丧失；

(4)在水溶液22--30℃条件下可形成聚合体，但生物活性改变不明显；

(5)在加入3--8％甘露醇冻干密封条件下，室温贮存1．5年，4℃贮存2年，-20℃贮存3年，生物活性不改变；

(6)在HPLC分析条件下，由4个组份组成，各组份相对峰面积为：峰1 10．4％，峰2 6．4％，峰3  36．3％，峰4 7．3％，各峰保留时间分别为峰1 2．88分，峰2 3．93分，峰3 5．09分，峰4 7．41分。每个组份单独实验，均有生物活性；

(7)经SDS--PAGE分析，显示2条带，其分子量分别为8500Da，10800Da，经HPLC分析，CMGSP的数均分子量为9800Da，重均分子量为l0500Da，2个组份均有生物活性。

经紫外扫描光谱图为，在l95±2nm及255±2nm处有两个特征性的吸收峰。

利心康是为一类具有刺激原代培养的心肌细胞的DNA合成和蛋白质合成，促进心肌细胞的分裂增殖及保护心肌细胞膜的分子量为5000--l2000Da的小分子多肽混合物。

其分成四个组份，单一组份或二种及多组份组合使用均有效。

附图1为本发明HPLC分析

本发明药物生物活性表现方法实例：

取SD胚胎鼠(孕l2--l6天)，无菌分离心脏，胰蛋白酶分离心肌细胞，用DMEM培养基洗涤3次后，用含l0％小牛血清的DME／Fl2培养基配制2-5×10⁵个细胞／ml，置96孔培养板内，每孔0．15ml，37℃，5％CO₂条件下孵育24小时。用无血清DME／F12培养基换液后，实验孔加入5-40μg／孔的CMGSP，对照孔仅加DME／F12培养基，继续培养48小时，每孔加入5μlMTT(1．5mg／ml，DME培养基配制)，继续培养4--6小时，每孔加入二甲基亚砜100μl终止反应置酶标仪570nm条件下测OD值，以实验孔／对照孔＞1．7倍为有活性。测定结果如下：