[发明专利]疫苗或与其相关的改进

说明书

本发明涉及疫苗或与其相关的改进，具体地说，涉及一种用于如含有合成抗原的疫苗的新佐剂。

许多成功的人用和兽用疫苗都使用减毒的活病原体。然而，近年来对大范围病原体感染的研究已能够分辨出潜在保护性种属特异性抗原，这些抗原能用重组DNA技术和改良的培养，收获和纯化技术大批量地生产。生产模拟天然抗原（亚单位疫苗）重要表位的全合成肽抗原现在也是可行的。使用计算机模拟技术可以设计出适宜的肽。这种人造疫苗具有许多潜在的优点，包括纯净、稳定、保护水平高，特异和确保无任何病原体性质（这些性质有时在含有减毒病原体的疫苗上观察到）。

不足的是，不论用化学合成还是重组方法制备的低分子量抗原都存在一种固有的低抗原性;通常，它们是免疫反应的弱激活剂。即使与一个载体蛋白如纯化的结核菌素蛋白衍生物（PPD）结合，它们的免疫原性也常常不足以诱发足量的反应。

使用佐剂能够克服这个问题，但是，这种佐剂带来进一步的困难。目前准许用于人的佐剂只有氢氧化铝。然而，由于它不能促进细胞调节免疫（CMI）（成功抗细胞内病原体如利什曼和弓形体的疫苗的一种本质特性），所以氢氧化铝不被认为是一种对所有抗原都适当的佐剂。弗氏完全佐剂（FCA）确实能够刺激细胞免疫，但是由于它促进肉芽瘤的形成，粘连和其它毒副作用而不适合人用或兽用。FCA还会引起持续数月的局部炎性反应。迫切需要能提高细胞免疫力（CMI），尤其与用FCA观察到的水平类似的非毒性新佐剂。确实，如果认识到（realised）亚单位疫苗的全部潜力，这种佐剂将是必要的。

现在我们已经发现包裹有抗原的非离子表面活性剂囊（泡）能用作有效的免疫佐剂，即使使用短肽抗原，它也固有地激发弱的免疫反应。我们确实观察到它与使用FCA作佐剂相比，抗体效价的数量级相同，T细胞刺激指数率较高，然而，不存在毒性。而且，免疫反应可能在质量上和数量上改变，这在后面作更详细的讨论。

最为熟悉的囊（泡）是有磷脂双层的脂质体。然而，其它两亲分子（包括非离子型表面活性剂（NIS））也能被制备形成囊（泡）。这种NISV确实已经被建议用作了药物载体，例如，作抗癌剂的氨甲蝶呤和doxorubicin。但是，我们并没有完全清楚即使当单独抗原只能诱发一个最小反应时，NISV也能极大地加强这种肽疫苗的反应的所有原因。

因而，一方面我们的发明提供了一种疫苗，它含有至少一种包裹于NISV中的抗原，特别是合成或重组来源的一种肽。

另一方面我们的发明是一种增强至少一种抗原在哺乳动物或非哺乳动物中的免疫反应的方法，包括使用包裹在NISV中的至少一种所说的抗原。

我们的发明另一个目的是一种制备疫苗的方法，包括把至少一种抗原，（如合成或重组起源的肽）包裹在NISV中。

用于制备NISV的非离子表面活性剂可以是任何药理学上可接受的具有适当表面活性性质的物质。这种物质优选的例子是甘油酯类。这种甘油酯类可以包含一种或两种高级脂肪族酰基。例如，在每个酰基部分含有至少10个碳原子。优选甘油单酯类，特别是含C₁₂-C₂₀链烷酰基或链烯酰基（例如己酰基，月桂酰基，肉豆蔻酰基，棕榈酰基、油基或硬脂酰基）部分的那些。最佳的表面活性剂是1-棕榈酰基甘油酯。

含醚键的表面活性剂也可以用作为本发明的NISV所包括的非离子型表面活性剂。这类物质的优选例是基于甘油或甘醇，尤其是4个碳原子以下的低级脂肪族甘醇，最佳为1，2-亚乙基二醇的含醚键的表面活性剂。以这种甘醇为基础的表面活性剂可以含一个以上的甘醇单元，优选的是不多于5个甘醇单元，最佳的为2或3个甘醇单元。例如二甘醇鲸蜡醚或聚氧乙烯基-3-月挂醚。甘醇或甘油单醚是优选的，特别是含C₁₂-C₂₀链烷基或链烯基例如辛基、月挂基、肉豆蔻基、鲸蜡基、油基或硬脂烷基部分的那些。

可用于本发明的环氧乙烯缩合产物含括在WO88/06882中公开的那些，即，聚氧乙烯高级脂肪族醚类和胺类表面活性剂，特别优选的含醚键的表面活性剂是1-单鲸蜡基甘油醚和二甘醇鲸蜡基醚。然而，为用于本发明必须选择药理学上可接受的物质，优选那些在哺乳动物体中容易被生物降解的。为此，我们推荐用前面已提到的甘油酯来制备囊（泡），以通过皮下，肌肉内，表皮内或腹膜内注射给药，或者通过粘膜如口腔的，鼻的、支气管的、泌尿生殖的或直肠的方式给药，优选口腔给药。