[发明专利]利用转拼核酶摘除细胞

权利要求书

1、一种多核苷酸分子，该分子编码转拼核酶，该核酶的序列为融合RNA，该融合RNA的序列包括：

(1)第一RNA序列，该第一RNA序列足以使该核酶与靶RNA杂交，

(2)第二RNA序列，由于该核酶转拼活性的结果，该第二RNA序列能够被共线性地转染至靶RNA中；其中该多核苷酸分子的表达与转录激活子蛋白的表达进行了可操纵地连接，且其中所说的第一RNA序列是与编码所说转录激活子蛋白的RNA杂交的序列。

2、根据权利要求1所述的多核苷酸分子，其中所说的转录激活子是GAL4。

3、根据权利要求1所述的多核苷酸分子，其中所说的第二RNA序列包括编码对宿主细胞有毒的肽的序列。

4、根据权利要求3所述的多核苷酸分子，其中所说的肽是DTA肽。

5、根据权利要求4所述的多核苷酸分子，其中所说的DTA肽是突变肽序列。

6、根据权利要求5所述的多核苷酸分子，其中所说的突变肽序列包括由SEQ  ID  No.40编码的氨基酸。

7、根据权利要求5所述的多核苷酸分子，其中所说的突变肽序列包括由SEQ  ID  No.41编码的氨基酸。

8、根据权利要求1所述的多核苷酸分子，其中所说的第一RNA序列是与GAL4杂交的序列，且其中所说的第二RNA序列是编码DTA肽的序列。

9、根据权利要求1-8中任一项所述的多核苷酸分子，其中所说的分子是RNA。

10、根据权利要求1-8中任一项所述的多核苷酸分子，其中所说的分子是DNA。

11、一种包含核酶表达盒的多核苷酸分子，该盒能稳定地插入至宿主基因组中，且该盒包括能够在宿主中发挥功能且与权利要求1-9任一项的多核苷酸的编码序列可操纵地连接的启动子序列。

12、一种包含权利要求11多核苷酸分子的宿主细胞。

13、根据权利要求12所述的宿主细胞，其中所说的宿主细胞是病毒细胞。

14、根据权利要求12所述的宿主细胞，其中所说的宿主细胞是原核植物细胞。

15、根据权利要求12所述的宿主细胞，其中所说的宿主细胞是真核生物细胞。

16、根据权利要求15所述的宿主细胞，其中所说的真核生物细胞是植物细胞。

17、根据权利要求15所述的宿主细胞，其中所说的真核生物细胞是动物细胞。

18、根据权利要求17所述的宿主细胞，其中所说的动物是果蝇。

19、根据权利要求17所述的宿主细胞，其中所说的动物是哺乳动物。

20、根据权利要求19所述的宿主细胞，其中所说的动物是人。

21、一种用于体外转拼的方法，该方法包括以下步骤：

（1）向转拼反应混合物中提供权利要求9的多核苷酸分子，该多核苷酸分子包括能够与第二多核苷酸杂交的序列;

（2）向该反应混合物中提供所说的第二多核苷酸;

（3）在所说的条件下催化所说的第二多核苷酸的转拼。

22、一种用于体内转拼的方法，该方法包括以下步骤：

（1）为宿主细胞提供权利要求9的多核苷酸;

（2）在所说的宿主细胞中表达由所说分子编码的所说的核酶;

（3）在所说的宿主细胞中表达所说核酶的底物;

（4）在所说的宿主细胞中用该底物催化该核酶的转拼。

23、一种灭活靶RNA活性的方法，该方法包括：

（1）向转拼反应混合物中提供权利要求9的多核苷酸，所说的核酶对靶RNA具有催化活性，该催化活性导致该靶RNA功能的失活;

（2）向该混合物中提供所说的靶RNA;

（3）提供条件，使得该多核苷酸表达该催化活性。