[发明专利]传染性支气管炎病毒疫苗

说明书

本发明涉及编码传染性支气管炎病毒（IBV）的刺突蛋白多肽的一种核酸顺序、含有这种核酸顺序的重组核酸分子、含有所述核酸顺序的载体或宿主细胞、含有IBV刺突蛋白多肽的氨基酸顺序的多肽、与所述多肽起免疫反应的抗体或抗血清以及用于保护动物使之免受IBV感染的疫苗。

IB病毒能使鸡产生急性传染病，其特点是典型的呼吸症状，如气管啰音、气喘、咳嗽和流鼻涕。IB能引起很高的死亡率，特别是在幼鸡中。除此之外，肾脏和生殖器官系统也会受到影响，后者的损害会引起产卵鸡或雌种鸡产蛋率下降。鸡易受IB感染，尤其是适于烤制的小鸡更易受某些大肠杆菌菌株的传染，结果增加了死亡率。

过去鸡被认为是唯一的IB病毒宿主，但近来从火鸡中也分离出了这种病毒。

IBV是冠状病毒中的一种，它是一组含有由大约20kd单链RNA组成的基因组的被膜病毒。尤其是该基因组编码三种主要的结构蛋白：刺突蛋白（S），膜蛋白（M）和壳包核酸蛋白（N）。糖基化的刺突蛋白的155KD母体在两个结构不相关的亚单位S₁和S₂中转译以后被裂解。S₁和S₂各自的两个或三个拷贝体形成特殊的IBV表面结构，即刺突或外包膜突起。刺突蛋白及其亚单位片段在传染的禽类中诱导循环病毒中和抗体方面起着很重要的作用。

目前借助于活的减毒病毒疫苗保护鸡使之免受IBV感染，然而，这种类型的疫苗具有许多缺陷，这些缺陷包括稳定性差以及对肾脏、呼吸和生殖器官可能有坏影响，除此之外，使用减毒的活疫苗牵涉到使用部分减毒的致病病毒去接种动物的危险。另外减毒病毒还可能返复到毒性状态，从而导致接种动物生病并且有可能在家禽中传播该毒性病毒。

使用活的病毒疫苗还会遇到另外一个问题，就是用来培养疫苗病毒的细胞培养物可能会受到其它病毒的玷污。

通常，失活的病毒疫苗只能诱导低水平的免疫力，尤其是当需要局部保护呼吸和肠道系统的活性时，例如在本发明的情况下，这种疫苗还需要进行附加免疫（加强剂）。另外，失活处理可能会使病毒抗原决定子（诱导中和反应）发生变化，从而降低了病毒的保护能力。

目前用于对付IB的疫苗病毒是根据它们的抗原谱和诱导致病性（活的病毒疫苗）对其免逸原特性进行筛选的，疫苗中可以含有特殊的血清型如Connecticut（如Connecticut分离物A5968）或只对同源物起保护作用的Massachusetts（例如菌株Beau  dette，M41和M42），这些疫苗也可以使用具有广谱抗原的特殊病毒菌株，例如Holland（H）菌株（如H120和Ma5）。然而人已经知道上述疫苗对于属于Arkansas血清型的IB病毒的传染不能提供基本的免疫，它还需用Arkansas血清型IBV菌株对禽类进行附加接种免疫。这种血清型的存在首次为D.B.Fields（1973）所描述。

按照本发明，可以将主要编码属于Arkansas血清型IBV菌株的刺突蛋白多肽或其抗原片段的核酸顺序用于制备一种疫苗，该疫苗可用来免疫接种受Arkansas血清型IBV菌株感染的禽类，而且这种疫苗没有上述活的病毒或失活IBV疫苗所存在的缺陷。

为了确定特异病毒菌株是否属于Arkansas血清型，即属于与IBV菌株DPI  3186同样的血清型，应该使用Cowen和Hitchner（1975）和Gelb等人（1981）所述的病毒一中和测试法。

用于本发明的“核酸顺序”系指任意长度的核苷酸的一种聚合型，它可以指核糖核酸顺序也可以指脱氧核糖核酸顺序。原则上，该术语指的是分子的基本结构，因此，该述语包括双链和单链DNA和单链RNA及其变体。

更进一步说，可以使用的本发明的核酸顺序是那些基本上编码由IBV产生的菌株DPI  3168的刺突蛋白多肽或其抗原片段的核酸顺序。

优选的用于本发明的核酸顺序是基本上编码具有氨基酸顺序1-1168（示于SEQ  ID  NO：1中）的多肽或其抗原片段的核酸顺序。

编码属于Arkansas血清型的IBV菌株刺突蛋白多肽的抗原片段的核酸顺序也包括在本发明的范围之内。

特别是所述的核酸顺序编码由IBV产生的菌株DPI刺突蛋白多肽的抗原片段。

本发明中所用的术语“抗原片段”表示具有一定分子结构的所述IBV刺突蛋白多肽的片段，当该分子结构以适当形式存在时，它能在患病动物体内对所述的IBV刺突蛋白诱发免疫应答，此外，所述的片段对于属于Arkansas血清型的IBV是特异的。