[其他]冻干的有生物活性的再生生长激素的生产方法

说明书

本发明是有关控制释放植入物的一个生产方法，该植入物适用于把有生物活性的再生生长激素按控制了的和持续的速率，向受体植入。尤其本发明是关于牛生长激素和猪生长激素的纯化方法，此方法用DNA工艺，形式上适用于有关方法的控制。

生长激素是多种蛋白质，它们参于调节蛋白质的代谢和脂肪、碳水化合物、矿物质等的代谢。生长激素影响机体的新陈代谢，它增加细胞蛋白质的合成和减少蛋白质的退化，就象在人体中增加使用脂肪酸的速率和减少使用碳水使用化合物的速率而产生能量一样。

牛生长激素（BGH）猪生长激素（PGH）都是蛋白质，它们都含有191个氨基酸残基。这些蛋白质为“前生长激素”，在垂体前叶腺合成，共有26个加成的氨基酸残基附着于氨基的末端。这26个按序列的氨基酸先从垂体细胞分泌物中分离出来，生成了成熟的激素。本发明尝试用从垂体腺纯化的BGH证明了在牛中施用激素改进饲料向牛奶的转化，增加了牛奶的产量。〔Machlin，I.J.，每日科学杂志56：575-580（1973）〕。由于这个激素的活力具有潜在的经济价值，因而有兴趣得到价格合适的商业用量的BGH。本发明尝试将天然的PGH供给小猪使用，结果表明增加其生长速度。

这样，在近几年来有许多人注视着用再生DNA工艺来得到这些有商业价值激素的微生物合成在论文中已知的Gene无性操作工艺已知用于生成再生体向量，该向量能直接指导BGH和PGH的合成。例如：用BGH-代号CDNA连接到一个调节系统进行微生物转化，就显示出生成了所需的激素。Keshet等〔核酸研究，9：19-30（1981）〕报导了无性的一个很长的BGH多肽作为一个用部分PBR322-代号β-内酰胺酶合成的蛋白质对于大肠杆菌的表现是低水平的。在欧洲共同体专利申请号0103395，解释了几个表示向量，包括代号BGH多肽和许多氨基末端被删除部分的向量，BGH多肽与许多删去成熟激素的氨基末端部分均发现保留了生物活性，并且比叙述的表示系统的完整激素有更高的水平。

到目前为止，将BGH用于牛和将PGH用于猪，这仅仅是勉强成功的。在文章中已知的给药方式，有口服的、鼻嗅的、直肠的、局部的和肠胃外给药等。然而，上述这些方法对牛和猪的给药是不方便的，这是因为每天给每一个大体积的动物给药的次数及耗费是很大的。

皮下植入物提供了一个可选择的方法，该方法意味着对每头动物持续地给于再生BGH和PGH的有效剂量。此植入物有一个激素贮存器，在其周围有一层能渗透激素的保护壁。这些传送系统的优点是它们能在一段相当长的时间内，提供对动物的激素控制和预期释放率。遗憾的是，我们发现控制释放装置是取决于植入后的膨胀和分解。该装置中所含的BGH和PGH是在发酵介质中由再生微生物生成。这种现象就稀释了植入的激素，并相反地，影响了激素的释放率。因此，商业上需要一个生产再生生长激素的方法，形式上能有效地结合到控制植入物持续释放。

本发明是关于植入物的改进，这些植入物是用于对受体动物生长激素的控制和连续给药。这些植入物都是由一个浓缩化合物制成的，这浓缩化合物包含一个用DNA再生工艺生产的一种动物生长激素的生长促进量。尤其，本发明有关一个用再生DNA工艺生产纯化和浓缩牛生长激素及猪生长激素的方法，形式上适用于控制释放植入物;也叙述了生长激素用于动物的控制释放植入物的生产方法。本发明的方法是基于我们的发现即生长激素的盐水平减少到重量的5%就能消除膨胀问题，而这问题是过去当再生长激素和控制释放植入物相结合时所遇到的。与天然生长激素不同的是，再生产品含有实质量的盐，此盐大部分用作回收操作中缓冲剂。

除了移去大量的盐以外，本发明是关于在有缓冲盐的情况下，生成再生生长激素的方法。缓冲盐的存在将导至在一个润湿的生理环境中，植入物内出现约7.4的PH。从发展来看，本发明在这方面能防止植入物与在体内环境之间的PH梯度，这样的一个梯度将引起生长激素的无法被控制释放。

按照本发明的方法，动物生长激素是从微生物在发酵介质中转化而回收到的。它是反渗析的过程。一个渗析缓冲剂是一个从硷的PH到生理PH直至生长激素中盐的存在量少于5%其它渗析除盐的方法可以从低盐产品的制备中获得，例如排阻层析控制大小。低盐生长激素是这样制备的，即冻干后与生理可适应的聚合物混合制得一个组合物，将它压缩成单位剂量的皮下植入物形式。在这里“生理PH”的参考PH值约7.4。

附图是一个圆柱状植入物的横截面，此植入体用于对动物施以生长激素时控制释放。