[发明专利]VvMYBPro基因及应用和高效合成单宁的方法

说明书

本发明公开了VvMYBPro基因及应用和高效合成单宁的方法。本发明通过构建过表达载体、基因敲除和基因沉默载体，转化至农杆菌后通过农杆菌侵染的方法，得到转基因过表达愈伤组织（PRI‑VvMYBPro）、基因敲除（Crispr‑VvMYBPro）和基因沉默（RNAi‑VvMYBPro）愈伤组织，将质地柔软并快速生长的PRI‑VvMYBPro和含有空载（EV）的对照愈伤以及野生型（WT）愈伤同时用同种条件进行培养，而后对比分析其单宁含量，可知PRI‑VvMYBPro愈伤组织中的单宁含量明显高于空载组（EV）和野生组（WT）。VvMYBPro基因可应用于酿酒葡萄愈伤组织细胞工厂高效合成葡萄单宁。

技术领域

本发明涉及生物工程和基因工程技术领域，具体涉及一种VvMYBPro基因及应用和高效合成单宁的方法。

背景技术

单宁是一种广泛存在于葡萄中的多酚类化合物，其含量的多少影响葡萄酒的色泽及口感，对研究食品抗氧化，清除自由基等功能具有重要意义。

植物中的单宁主要通过类黄酮通路合成，以苯丙氨酸作为代谢底物，在苯丙氨酸解氨酶的作用下生成肉桂酸，肉桂酸在肉桂酸4-羟化酶的催化下生成香豆酸，接着由4-香豆酸辅酶A连接酶催化形成4-香豆酰-CoA，4-香豆酰-CoA同丙二酰-CoA共同合成查尔酮，查尔酮在查尔酮异构酶作用下产生无色柚皮素，为进一步在类黄酮途径下合成单宁提供条件，其中能够合成花青素还原酶的ANR基因在类黄酮通路中是控制单宁合成关键基因。

目前，我国葡萄酒产业正处于快速发展期，我国酿酒葡萄优质产区宁夏、新疆等地在气候上呈现日照强，积温高等特点，导致种植的酿酒葡萄普遍存在糖高酸低，单宁积累量不足，品质不协调等问题。为了改善葡萄酒的感官特点，常常选择添加化学合成的单宁改善葡萄酒品质，该方法不仅成本高，而且由于人工合成的单宁与葡萄自然产生单宁组成存在差异，使葡萄酒的风味不协调，因此，外源添加单宁的应用效果仍有较大提升空间。

因此，发掘一种高效合成酿酒葡萄单宁的方法是目前我国酿酒产业发展的迫切需求。

发明内容

本发明为解决现有酿酒产业单宁不足的问题，提供一种VvMYBPro基因及应用和高效合成单宁的方法。

为了实现以上目的，本发明采用如下技术方案：VvMYBPro基因在酿酒葡萄赤霞珠愈伤组织细胞工厂高效合成葡萄单宁的应用。

VvMYBPro基因编码序列为：