[发明专利]一种用于检测NSE的适配体传感器及其使用方法在审
| 申请号： | 202310222492.8 | 申请日： | 2023-03-09 |
| 公开（公告）号： | CN116359186A | 公开（公告）日： | 2023-06-30 |
| 发明（设计）人： | 王琼璘;张万存;郭鹏波 | 申请（专利权）人： | 河南省儿童医院郑州儿童医院 |
| 主分类号： | G01N21/64 | 分类号： | G01N21/64 |
| 代理公司： | 郑州优盾知识产权代理有限公司 41125 | 代理人： | 冉珊敏 |
| 地址： | 450000 河南省*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 检测 nse 适配体 传感器 及其 使用方法 | ||
1.用于检测NSE的适配体传感器，其特征在于：包括高亲和力适配体、荧光分子信标和缓冲溶液。
2.根据权利要求1所述的用于检测NSE的适配体传感器，其特征在于：所述高亲和力适配体的Kd值为3.75 nM。
3.根据权利要求2所述的用于检测NSE的适配体传感器，其特征在于：所述高亲和力适配体的序列如SEQ ID No.1所示。
4.根据权利要求2或3所述的用于检测NSE的适配体传感器，其特征在于：所述荧光分子信标与高亲和力适配体部分互补，缓冲溶液为含NaCl的磷酸盐缓冲液。
5.根据权利要求4所述的用于检测NSE的适配体传感器，其特征在于：所述荧光分子信标序列如SEQ ID No.2所示，其5’端设有6-FAM基团， 3’端设有淬灭基团BHQ1。
6.权利要求1-3、5任一项所述的适配体传感器的使用方法，其特征在于，步骤为：
（1）分别将高亲和力适配体和荧光分子信标溶于含NaCl的磷酸盐缓冲液中，制备高亲和力适配体溶液和荧光分子信标溶液；
（2）将一定量的高亲和力适配体溶液和荧光分子信标溶液混合均匀，水浴加热反应后冷却至室温再反应，得传感器溶液；
（3）向步骤（2）的混合溶液中加入待测样本，混合均匀反应1h后进行荧光检测，计算荧光信号的衰减效率，代入线性方程获得待测样本中NSE的浓度。
7.根据权利要求6所述的适配体传感器的使用方法，其特征在于：所述步骤（1）中高亲和力适配体溶液的浓度为0.3μΜ，荧光分子信标溶液的浓度为0.2μΜ。
8.根据权利要求6所述的适配体传感器的使用方法，其特征在于：所述步骤（2）中高亲和力适配体溶液和荧光分子信标溶液的摩尔浓度比为1:1.5；水浴加热的温度为95℃、时间为10min；室温再反应的时间为30min。
9.根据权利要求7-8所述的适配体传感器的使用方法，其特征在于：所述步骤（3）中混合溶液与待测样本的体积比为4:1。
10.根据权利要求9所述的适配体传感器的使用方法，其特征在于：所述荧光检测的激发波长为495 nm，发射波长为517 nm，荧光光谱的测定波长为510 nm-670 nm；线性方程为Y=2.223+0.359 CNSE ，R2=0.985。
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