[发明专利]一种表达几丁质酶的重组菌的构建及高酶活突变体的制备在审
| 申请号： | 202310144326.0 | 申请日： | 2023-02-20 |
| 公开（公告）号： | CN116254249A | 公开（公告）日： | 2023-06-13 |
| 发明（设计）人： | 宿玲恰;吴敬;袁源 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/42 | 分类号： | C12N9/42;C12N15/56;C12N15/75;C12N1/21;C12P19/14;C12R1/125 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 林娟 |
| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 表达 几丁质 重组 构建 高酶活 突变体 制备 | ||
1.一种几丁质酶BlChiA突变体，其特征在于，将SEQ ID NO.4所示氨基酸序列的第336位、472位中至少一个位点进行突变。
2.如权利要求1所述几丁质酶BlChiA突变体，其特征在于，所述突变体包括以下任一种：
(a)将SEQ ID NO.4所示氨基酸第336位的谷氨酸突变为赖氨酸；
(b)将SEQ ID NO.4所示氨基酸第472位的丙氨酸突变为苏氨酸；
(c)将SEQ ID NO.4所示氨基酸第336位的谷氨酸突变为赖氨酸，第472位的丙氨酸突变为苏氨酸。
3.编码如权利要求1或2所述突变体的基因。
4.携带如权利要求3所述基因的重组载体，其特征在于，所述载体为pHY300PLK系列载体。
5.如权利要求4所述的重组载体，其特征在于，含有如SEQ ID NO.5所示核苷酸序列的启动子PSpoVG。
6.如权利要求5所述的重组载体，其特征在于，以SEQ ID NO.6所示核苷酸序列编码的YqxI为信号肽。
7.一种表达几丁质酶BlChiA的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，以Bacillus subtilisWS9为宿主，携带如权利要求4-6任一所述的重组载体。
8.一种表达几丁质酶的方法，其特征在于，采用权利要求7所述重组枯草芽孢杆菌进行发酵。
9.如权利要求8所述表达几丁质酶的方法，其特征在于，将30-38℃、180-220rpm条件下培养6-12h的重组枯草芽孢杆菌以1-10％的接种量转入发酵培养基，于30～37℃培养至OD600为0.6～0.8，于30-35℃、200-220rpm条件下发酵36-60h。
10.权利要求1或2所述几丁质酶BlChiA突变体，权利要求3所述基因，权利要求4-6任一所述重组载体，权利要求7所述重组枯草芽孢杆菌，或权利要求8或9所述表达几丁质酶的方法在降解几丁质及其类似物中的应用。
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