[发明专利]一种大体积培养的CAR NK细胞的收获方法

权利要求书

1.一种大体积培养的CAR NK细胞的收获方法，其特征在于，包括如下步骤：

将大体积培养的CAR NK细胞培养物进行连续流离心，得到浓缩后的细胞；所述连续流离心的离心力为700～900g，转速为200～280rpm；

将浓缩后的细胞置换于新鲜培养基中，进行辐照处理，得到辐照后的细胞。

2.根据权利要求1所述的收获方法，其特征在于，所述连续流离心的离心力为750～850g，转速为240～260rpm；

更优选地，所述连续流离心的离心力为800g，转速为250rpm。

3.根据权利要求1所述的收获方法，其特征在于，所述辐照的能量源为X射线。

4.根据权利要求3所述的收获方法，其特征在于，所述辐照的剂量为10～15Gy。

5.根据权利要求3所述的收获方法，其特征在于，所述辐照的剂量率为1.0～1.5Gy/min。

6.根据权利要求1所述的收获方法，其特征在于，所述浓缩后的细胞在培养基中的密度为10⁵～10⁸cells/mL。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的收获方法，其特征在于，所述辐照处理之后还包括如下步骤：

对辐照后的细胞进行冻存制剂置换；

将所得冻存制剂中的细胞进行梯度降温，冻存。

8.根据权利要求7所述的收获方法，其特征在于，所述细胞在冻存制剂中的密度为10⁶～10⁸cells/mL。

9.根据权利要求7所述的收获方法，其特征在于，所述梯度降温的程序为：

(1)4℃平衡；

(2)以1℃/min的降温速率，将样本温度降至-13℃；

(3)以25℃/min的降温速率，将腔体温度降至-50℃；

(4)以10℃/min的升温速率，将腔体温度升至-23℃；

(5)以1℃/min的降温速率，将腔体温度降至-40℃；

(6)以10℃/min的降温速率，将样本温度降至-90℃。

10.根据权利要求7所述的收获方法，其特征在于，所述冻存的温度为-80℃～-196℃。