[发明专利]具有高效分泌表达非洲猪瘟病毒关键抗原P72的基因工程菌及其构建方法和应用

权利要求书

1.具有高效分泌表达非洲猪瘟病毒关键抗原P72的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌以解淀粉芽孢杆菌为出发菌株，将编码蛋白酶yow、AprE、NprE的信号肽核苷酸序列分别与优化改造的编码抗原P72的核苷酸序列进行融合构成新的融合基因SyP72、SAP72、SNP72转化到解解淀粉芽孢杆菌中得到三株基因工程菌株，所述融合基因SyP72、SAP72、SNP72的核苷酸序列如SEQ IDNO.1-3所示。

2.根据权利要求1所述的具有高效分泌表达非洲猪瘟病毒关键抗原P72的基因工程菌，其特征在于，所述蛋白酶yow、AprE、NprE的信号肽核苷酸序列如SEQ ID NO.4-6所示，优化改造的编码抗原P72的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。

3.根据权利要求1所述的具有高效分泌表达非洲猪瘟病毒关键抗原P72的基因工程菌，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌为解淀粉芽孢杆菌CPLK1314。

4.一种权利要求1所述的具有高效分泌表达非洲猪瘟病毒关键抗原P72的基因工程芽孢杆菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)对P72蛋白核苷酸序列进行优化改造并分别与编码蛋白酶yow、AprE、NprE的信号肽核苷酸序列融合构成新的融合基因SyP72、SAP72、SNP72；

(2)将SyP72、SAP72、SNP72基因片段与组成型表达载体pTK-PrepUT1T2分别双酶切，经过酶连和转化，得到重组分泌表达载体pTK-SyP72、pTK-SAP72、pTK-SNP72；

(3)重组分泌表达载体pTK-SyP72、pTK-SAP72、pTK-SNP72分别转入解淀粉芽孢杆菌中，构建得到yP72、AP72、NP72三株具有分泌表达非洲猪瘟病毒关键抗原P72的基因工程芽孢杆菌菌株。

5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)所述重组分泌表达载体pTK-SyP72、pTK-SAP72、pTK-SNP72的核苷酸序列如SEQ ID NO:8-10所示。

6.一种权利要求1所述的基因工程菌在分泌表达关键抗原P72中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述应用过程将基因工程菌yP72、AP72、NP72接种于优化培养基中活化过夜，再接种到优化培养基中发酵培养，离心收集上清液，在发酵液中成功检测到重组抗原P72表达。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述优化培养基优选包括：黄豆饼粉20g/L，胰蛋白2g/L，酵母提取物1.5g/L，NaCl 0.5g/L，硫酸镁0.002g/L，硫酸锰0.001g/L，磷酸二氢钾0.0016g/L，pH 7.0。

9.一种权利要求1所述的基因工程菌在制备预防非洲猪瘟口服疫苗中的应用。