[发明专利]一种用于肺腺癌辅助诊断的甲基化位点标志物及其应用

权利要求书

1.一种用于肺腺癌辅助诊断相关的甲基化位点标志物，其特征在于，该甲基化位点标志物是肺腺癌相关的甲基化位点chr5:37112010、chr16:62875877、chr6:50682050、chr13:31613633、chr2:43521317、chr6:166411604、chr5:37111954、chr6:50682024、chr10:130992603和chr2:126776294的组合。

2.用于扩增权利要求1所述的甲基化位点标志物的特异性扩增引物组合，其特征在于，这些引物组合为：

chr5:37112010的引物序列为：SEQ ID NO:1,SEQ ID NO:2；

chr16:62875877的引物序列为：SEQ ID NO:3,SEQ ID NO:4；

chr6:50682050的引物序列为：SEQ ID NO:5,SEQ ID NO:6；

chr13:31613633的引物序列为：SEQ ID NO:7,SEQ ID NO:8；

chr2:43521317的引物序列为：SEQ ID NO:9,SEQ ID NO:10；

chr6:166411604的引物序列为：SEQ ID NO:11,SEQ ID NO:12；

chr5:37111954的引物序列为：SEQ ID NO:13,SEQ ID NO:14；

chr6:50682024的引物序列为：SEQ ID NO:15,SEQ ID NO:16；

chr10:130992603的引物序列为：SEQ ID NO:17,SEQ ID NO:18；

chr2:126776294的引物序列为：SEQ ID NO:19,SEQ ID NO:20。

3.权利要求2所述的特异性扩增引物组合在制备肺腺癌辅助诊断试剂盒中的应用。

4.一种肺腺癌辅助诊断试剂盒，其特征在于，该试剂盒用于检测外周血DNA中chr5:37112010、chr16:62875877、chr6:50682050、chr13:31613633、chr2:43521317、chr6:166411604、chr5:37111954、chr6:50682024、chr10:130992603和chr2:126776294的甲基化程度。

5.根据权利要求4所述的辅助诊断试剂盒，其特征在于，该试剂盒含有权利要求2所述的特异性扩增引物组合。

6.根据权利要求5所述的辅助诊断试剂盒，其特征在于，该试剂盒还含有处理样品的试剂。

7.根据权利要求6所述的辅助诊断试剂盒，其特征在于，所述处理包括提取DNA的步骤、使胞嘧啶转化为尿嘧啶的步骤；其中：

所述使胞嘧啶转化为尿嘧啶的步骤所使用的试剂最常见的是亚硫酸氢盐试剂，包括亚硫酸氢盐缓冲液和保护缓冲液；

所述DNA的提取试剂包括裂解缓冲液、结合缓冲液、清洗缓冲液和洗脱缓冲液，其中，裂解缓冲液包括蛋白变性剂、去垢剂、pH缓冲剂和核酸酶抑制剂；结合缓冲液包括蛋白变性剂和pH缓冲剂；pH缓冲剂包括Tris、硼酸、磷酸盐、MES中的一种或多种；所述核酸酶抑制剂包括EDTA、EGTA和DEPC中的一种或多种；清洗缓冲液包括Tris、硼酸,山梨醇,聚乙二醇和巯基乙醇中的一种或多种；洗脱缓冲液包括NaCl,Tris-HCl和EDTA中的一种或多种。

8.根据权利要求5所述的辅助诊断试剂盒，其特征在于，该试剂盒还包括任意一种或多种甲基化检测方法所使用的试剂。