[发明专利]结直肠癌SDC2甲基化检测引物、探针、试剂盒及方法在审
| 申请号： | 202211609009.3 | 申请日： | 2022-12-14 |
| 公开（公告）号： | CN116254338A | 公开（公告）日： | 2023-06-13 |
| 发明（设计）人： | 陈刚 | 申请（专利权）人： | 福建省肿瘤医院（福建省肿瘤研究所;福建省癌症防治中心） |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 福州市博深专利事务所(普通合伙) 35214 | 代理人： | 谢子能 |
| 地址： | 350000 *** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 直肠癌 sdc2 甲基化 检测 引物 探针 试剂盒 方法 | ||
1.一种结直肠癌SDC2甲基化检测的引物和探针，其特征在于，引物为SDC2cgA引物和/或SDC2 cgB引物，探针为SDC2 cgA探针和/或SDC2 cgB探针；
所述SDC2 cgA引物由SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:3中任意一个引物和SEQ ID NO:4～SEQ ID NO:6中任意一个引物组成；
所述SDC2 cgB引物由SEQ ID NO:13～SEQ ID NO:15中任意一个引物和SEQ ID NO:16～SEQ ID NO:18中任意一个引物组成；
所述SDC2 cgA探针由SEQ ID NO:7～SEQ ID NO:9中任意一个探针和SEQ ID NO:10～SEQ ID NO:12中任意一个探针组成；
所述SDC2 cgB探针为SEQ ID NO:19～SEQ ID NO:21中任意一个探针。
2.根据权利要求1所述的结直肠癌SDC2甲基化检测的引物和探针，其特征在于，所述探针的3＇端皆标记有MGB淬灭基团，所述SEQ ID NO:7～SEQ IDNO:9和SEQ ID NO:19～SEQ IDNO:21的5＇端标记有FAM荧光报告基团，所述SEQ ID NO:10～SEQ ID NO:12的5＇端标记有VIC荧光报告基团。
3.根据权利要求1所述的结直肠癌SDC2甲基化检测的引物和探针，其特征在于，所述引物由SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:14和SEQ IDNO:18组成，所述探针由SEQ IDNO:8、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:20组成。
4.一种结直肠癌SDC2甲基化检测的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1～3任一项所述的引物和探针。
5.根据权利要求4所述的结直肠癌SDC2甲基化检测的试剂盒，其特征在于，还包括内参引物和内参探针，所述内参引物由SEQ ID No.22和SEQ ID No.23两个引物组成，所述内参探针为SEQ ID No.24所示探针。
6.根据权利要求4所述的结直肠癌SDC2甲基化检测的试剂盒，其特征在于，还包括2×qPCR Master Mix、模板DNA和DEPC水。
7.根据权利要求6所述的结直肠癌SDC2甲基化检测的试剂盒，其特征在于，所述模板DNA的具体制备方法为：样品提取核酸DNA后，再对核酸DNA进行甲基化处理，得到模板DNA。
8.一种结直肠癌SDC2甲基化检测的方法，其特征在于，使用权利要求4所述的结直肠癌SDC2甲基化检测的试剂盒进行荧光PCR检测，评估标准为：
内参基因的Ct值≤37，甲基化SDC2基因Ct值≤38时判断样本为阳性；内参基因的Ct值≤37，甲基化SDC2基因FAM通道Ct值＞38时判定为阴性样本；内参基因Ct值＞37或者无Ct值时，判定为样本不合格。
9.根据权利要求8所述的结直肠癌SDC2甲基化检测的方法，其特征在于，所述荧光PCR检测的反应程序为：95℃预变性5min；95℃15s，55℃10s，45次循环；末端检测FAM通道和VIC通道。
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