[发明专利]基于HR-MS和NMR的HSCCC溶剂系统筛选方法

权利要求书

1.基于HR-MS和NMR的HSCCC溶剂系统筛选方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

步骤1，制备样品：取青稞幼苗，切成1cm小段，加入150L 30％乙醇80℃下热回流提取2次，每次2h，合并提取液，减压浓缩至无醇味，上AB-8大孔树脂；先后用去离子水、20％乙醇、30％乙醇、50％乙醇洗脱5BV；取30％乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，冷冻干燥，得到30％乙醇部位；取30％乙醇部位，注入DAC100制备液相色谱，用40％甲醇等度洗脱，得到HSCCC待分离样品；

步骤2，HPLC分析：将步骤1的待分离样品注入HPLC分析，色谱条件：Platisil ODS C18色谱柱(250×4.6mm id,5μm)；流动相：甲醇-水，0-30min，10％-45％乙腈；流速，1.0mL/min；柱温30℃；检测波长，270nm；

步骤3，HR-MS分析：将步骤1的待分离样品注入HR-MS分析，质谱条件：SCIEX的TripleTOF 6600Plos质谱仪，采用TurbolonSpray离子源，气帘气30psi，离子源载气150psi，离子源载气260psi，离子源温度550℃；IDA正离子模式；喷雾电压5500V；CAD载气7psi，一级TOFMS质量扫描范围50-1500Da，诱导碰撞电压10V；二级TOF MS质量扫描范围50-1500Da，诱导碰撞电压45V，在正离子或负离子模式下提取化合物MS及MS/MS信息，通过MassBankdatabase数据库，筛选匹配得分最高的化合物；

步骤4，NMR分析：将步骤1的待分离样品用DMSO溶解，注入NMR分析，分析条件：采用600MHz核磁共振仪，采集参数：zg30脉冲序列，32K数据点，扫描次数64次，弛豫延迟时间13s，谱图宽度16ppm；提取¹H-NMR和COSY谱图，合所述步骤3中化合物结构，筛选¹H-NMR的特征信号，作为分配系数测定定量依据；

步骤5，溶剂系统筛选：取乙酸乙酯、正丁醇、水，分别按照9：1：10，8：2：10，7：3：10，6：4：10，5：5：10，4：6：10，v/v/v比例配置溶剂系统，分别加入等量的步骤1待分离样品于其中，充分摇晃，待分配平衡后，分别取等体积上下相，减压浓缩至干；将所述浓缩至干的样品用等体积氘代试剂DMSO溶解，注入NMR分析，分别提取特征信号¹H-NMR的峰面积，记为A_U和A_L，分配系数K＝A_U/A_L，分离因子α＝K₂/K₁，K₂＞K₁。

2.根据权利要求1所述的基于HR-MS和NMR的HSCCC溶剂系统筛选方法，其特征在于，所述步骤2中，HPLC色谱图中只有1个色谱峰。

3.根据权利要求1所述的基于HR-MS和NMR的HSCCC溶剂系统筛选方法，其特征在于，所述步骤3中，通过HR-MS分析，要提取到至少2个化合物的MS及MS/MS信息，并得到相对应化合物结构信息。

4.根据权利要求1所述的基于HR-MS和NMR的HSCCC溶剂系统筛选方法，其特征在于，所述步骤4中，每个化合物要筛选到至少1个特征¹H-NMR信号。

5.根据权利要求1所述的基于HR-MS和NMR的HSCCC溶剂系统筛选方法，其特征在于，所述步骤5中，K和α应满足：0.2≤K≤5，α≥1.5；满足上述条件的溶剂系统可用于HSCCC分离，乙酸乙酯-正丁醇-水＝7：3：10，v/v/v的K值和α值符合条件，可用于HSCCC分离。

6.一种HSCCC溶剂系统的应用，其特征在于，所述的HSCCC溶剂系统为权利要求1-5筛选出的HSCCC溶剂系统，所述的HSCCC溶剂系统可用于HSCCC分离中，具体过程如下：

步骤1，取待分离样品，注入到TBE-300B HSCCC中分离，分离条件：溶剂系统，乙酸乙酯-正丁醇-水＝7：3：10，v/v/v，下相为流动相；分离温度，45℃；流速，1.8mL/min；检测波长，270nm；

步骤2，将分离得到的化合物用DMSO溶解，注入NMR分析，经¹H-NMR和¹³C-NMR鉴定结构，然后比对分离前后的¹H-NMR结果。