[发明专利]半理性设计酶定向进化方法及其在腈水解酶分子改造中的应用

权利要求书

1.一种半理性设计酶定向进化方法，其特征在于，包括如下步骤：

将待设计的酶进行建模，建模后将底物分子与酶进行分子对接，将底物距离内的残基定义为活性口袋残基；并，

分别利用丙氨酸、亮氨酸和苯丙氨酸对活性口袋残基进行扫描突变获得突变体，并测定突变体对模型底物的酶活性，筛选突变位点；并，

对筛选得到的突变位点进行定点饱和突变和/或组合突变，获得突变体，将突变体构建至宿主中进行表达，筛选得到改造后的突变体。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述待设计的酶为腈水解酶。

3.一种腈水解酶突变体，其特征在于，所述突变体是对氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的腈水解酶亲本的170、197、198、202位残基中的一种或多种进行突变。

4.根据权利要求3所述腈水解酶突变体，其特征在于，所述腈水解酶突变体是将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的第170位色氨酸突变为甘氨酸；或，将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的第198位缬氨酸突变为亮氨酸；或，将氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示的第197位甲硫氨酸突变为苯丙氨酸；或，将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的第202位苯丙氨酸突变为甲硫氨酸。

5.根据权利要求3所述腈水解酶突变体，其特征在于，所述腈水解酶突变体是将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的第198位缬氨酸突变为亮氨酸，并将第170位色氨酸突变为甘氨酸。

6.一种编码权利要求3～5任一项所述腈水解酶突变体的基因。

7.一种携带权利要求6所述基因的表达载体。

8.一种表达权利要求3～5任一项所述腈水解酶突变体的工程菌。

9.权利要求3～5任一项所述腈水解酶突变体在催化腈类底物中的应用。

10.根据权利要求9所述应用，其特征在于，所述腈类底物为芳香腈类底物或脂肪腈类底物。