[发明专利]利用甘油合成乙偶姻和生物电的希瓦氏菌菌株及构建方法在审

申请号：	202211508374.5	申请日：	2022-11-28
公开（公告）号：	CN115820688A	公开（公告）日：	2023-03-21
发明（设计）人：	王智文;孔书田;赵俊桃;陈涛	申请（专利权）人：	天津大学
主分类号：	C12N15/54	分类号：	C12N15/54;C12N15/53;C12N15/60;C12N15/61;C12N15/31;C12N15/74;C12N1/21;C12P7/26;H01M8/16;C12R1/01
代理公司：	天津市北洋有限责任专利代理事务所 12201	代理人：	陆艺
地址：	300350 天津市津南区海***	国省代码：	天津;12
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摘要：
搜索关键词：	利用甘油合成乙偶姻生物电希瓦氏菌菌株构建方法
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【权利要求书】：

1.利用甘油合成乙偶姻和生物电的希瓦氏菌菌株构建方法，其特征是包括如下步骤(1)将来源于大肠杆菌(Escherichia coil K12 MG1655)编码甘油转运蛋白的glpF基因、经过密码子优化的来源于肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae MGH 78578)编码甘油激酶的glpK基因和编码甘油-3-磷酸脱氢酶的glpD基因以及来源于大肠杆菌(Escherichiacoil K12MG1655)编码三磷酸异构酶的tpiA基因连接成片段glpF-glpK-glpD-tpiA，并连接在载体PYYDT上，得到质粒PYYDT-glpF-glpK-glpD-tpiA；

(2)将质粒PYYDT-glpF-glpK-glpD-tpiA导入希瓦氏菌MR-1中，得到甘油利用菌株MR-KR；

(3)将来源于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis 168)编码α-乙酰乳酸合成酶的alsS基因和编码α-乙酰乳酸脱羧酶的alsD基因融合，并连接在载体PHG13-Ptet上，得到质粒PHG13-Ptet-alsS-alsD；

(4)将质粒PHG13-Ptet-alsS-alsD导入甘油利用菌株MR-KR中，得到利用甘油合成乙偶姻和生物电的希瓦氏菌菌株KR-PHG13-Ptet；

所述glpF基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述glpK基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

所述glpD基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

所述tpiA基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

所述载体PYYDT的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；

所述alsS基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；

所述alsD基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；

所述载体PHG13-Ptet的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示。

2.权利要求1的方法构建的利用甘油合成乙偶姻和生物电的希瓦氏菌菌株。