[发明专利]一株产具有抗氧化作用胞外多糖的德式乳杆菌、多糖、方法及其应用

权利要求书

1.一株产具有抗氧化作用胞外多糖的德式乳杆菌(Lactobacillus Delbrueckii)，其特征在于：所述德式乳杆菌的名称为：KY20，分类名称为：德式乳杆菌保加利亚亚种(Lactobac illus delbrueckii subsp.bulgaricus)，保藏编号为：CGMCC No.20084，保藏日期：2020年6月15日，北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院生物研究所，保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。

2.根据权利要求1所述的产具有抗氧化作用胞外多糖的德式乳杆菌，其特征在于：所述德式乳杆菌在固体平板上菌落较小、呈圆形、乳白色、边缘整齐。

3.根据权利要求1所述的产具有抗氧化作用胞外多糖的德式乳杆菌，其特征在于：所述德式乳杆菌来源于河套地区自制酸奶；

或者，所述德式乳杆菌具有较强的耐胆汁盐和耐酸能力。

4.根据权利要求1所述的产具有抗氧化作用胞外多糖的德式乳杆菌，其特征在于：所述德式乳杆菌产生的胞外多糖是酸性多糖。

5.根据权利要求4所述的产具有抗氧化作用胞外多糖的德式乳杆菌，其特征在于：所述德式乳杆菌胞外多糖经DEAE-FF离子交换柱进行不同浓度NaCl溶液分离后，所得多糖以0.1mol/LNaCl为洗脱剂时为主；

所述德式乳杆菌胞外多糖纯化后不存在或存在非常少量的核酸和蛋白质；

所述德式乳杆菌胞外多糖含有葡萄糖、羧基和存在分子间和分子内氢键；

所述德式乳杆菌胞外多糖具有抗氧化能力，通过对其总抗氧化能力的测定，其胞外多糖拥有显著的总抗氧化能力；且随着胞外多糖浓度的增强，所述德式乳杆菌的总抗氧化能力也随之增强。

6.根据权利要求1至5任一项所述的产具有抗氧化作用胞外多糖的德式乳杆菌，其特征在于：所述德式乳杆菌的基因序列为SEQ ID No.1。

7.如权利要求1至6任一项所述的德式乳杆菌在制备具有抗氧化作用的药物和/或食品和/或保健品和/或化妆品和/或微生态制剂方面中的应用。

8.如权利要求1至6任一项所述的德式乳杆菌产生的具有抗氧化作用胞外多糖。

9.如权利要求8所述的胞外多糖的提取纯化方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)德式乳杆菌KY20胞外多糖的提取

将活化好的德式乳杆菌KY20按3％-5％接种量接种到MRS液体培养基中，于37℃静置培养过夜；将发酵液于8000r/min，4℃离心20min，收集上清液，蒸发浓缩；向上清液中加入80％的三氯乙酸溶液至终浓度为4％，4℃静置24h，调pH至中性，8000r/min，4℃离心20min，收集上清；向上清液中加入3倍体积的预冷乙醇，4℃静置24h，8000r/min，4℃离心20min收集沉淀；将沉淀以少量蒸馏水溶解，再以预处理的透析袋于4℃透析48h，透析袋的截留分子量8000～14000Da，每8h换一次水，透析液真空冷冻后即为胞外多糖粗品；

(2)德式乳杆菌KY20胞外多糖的纯化

将色谱层析柱中装入DEAE-FF阴离子交换柱，用蒸馏水平衡过夜；胞外多糖粗品用蒸馏水溶解，上样，质量浓度为10mg/mL，分别用蒸馏水及0～0.5mol/LNaCl进行线性梯度洗脱，3mL/管分部收集，洗脱速率为1mL/min，逐管使用苯酚-硫酸法及紫外A 280nm波长处检测多糖含量和蛋白质含量；按多糖含量值收集并合并单一峰组分，去离子水透析至无Cl-检出，冷冻干燥得纯多糖。

10.如权利要求9所述的胞外多糖在制备具有抗氧化作用的药物和/或食品和/或保健品和/或化妆品和/或微生态制剂方面中的应用。