[发明专利]一种猪萨佩罗病毒细胞株、其培养方法及应用

说明书

一种猪萨佩罗病毒毒株、其培养方法及应用，名称为PSV2019CM，于2021年11月1日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCNO.V202175，全长为7,567bp，具有一个长度为6,996bp的ORF，该ORF编码2,331个氨基酸的多聚蛋白前体，其基因组两侧分别有一个465bp的5′‑UTR和一个106bp的3′‑UTR。本发明的猪萨佩罗病毒用于PSV病毒疫苗，对近年来国内流行的PSV毒株具有较好的交叉保护性，抗原性和免疫原性均较好，感染猪体临床表征正常，体重增长稳定，不出现排毒现象，体内能产生高水平PSV抗体，血清IgG抗体的OD450值最高可达1.2，免疫后60d抗体的OD450水平仍维持在1.0。

技术领域

本发明属于兽用生物制品领域，具体涉及一种猪萨佩罗病毒细胞株、其培养方法及应用。

背景技术

猪萨佩罗病毒(porcine sapelovirus，PSV)，属于小RNA病毒科萨佩罗病毒属，是一类无囊膜包被的单股正链RNA病毒，病毒粒子为直径约30nm的微球。PSV在世界范围内广泛流行，主要通过粪-口途径传播，可引起猪群腹泻、肺炎、脑脊髓灰质炎、生殖系统障碍等多系统综合征，同时也可能出现无症状感染，临床上还会与猪细小病毒(porcineparvovirus，PPV)、猪瘟病毒(classical swine fever virus，CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory disorder syndrome virus，PRRSV)、猪肠道病毒(porcine enterovirus，PEV)等发生混合感染，使得猪群的发病情况变得更加复杂，导致猪群死亡率增加，给养猪业带来严重危害。

猪萨佩罗病毒最初是从腹泻猪的肠道中分离得到，因此以前被归类为猪肠道病毒，并命名为猪肠病毒8型(PEV-8)。2002年，Krumbholz等指出，与其他肠道病毒相比较，猪肠病毒8型具有独特的L蛋白及结构高度特异的2A基因和5′端非编码区(5′-untranslatedregion，5′-UTR)，因此它被划分为一个新的病毒属。2014年，国际病毒分类委员会(ICTV)正式将其命名为猪萨佩罗病毒(porcine sapelovirus，PSV)，归类为小RNA病毒科(picornaviridae)萨佩罗病毒属(sapelovirus)。除猪萨佩罗病毒外，该属还包含禽萨佩罗病毒(avian sapelovirus)和猿萨佩罗病毒(simian sapelovirus)。目前为止，世界各国所报道的PSV均属同一血清型，有学者指出PSV具有二种基因亚型，但国际上尚未得出这一结论，仍需要加以证实。

PSV对环境具有高度抗性，室温下可以存活几个月。对乙酸、氯仿等有机溶剂不敏感，能抵抗胰酶。耐热较强，56℃条件下作用10min不能将其灭活，热灭活的最低条件为65℃作用5min或者60℃作用10min。PSV不能凝集和吸附各种动物红细胞。次氯酸钠、70％乙醇及紫外线能使其灭活，但紫外线不影响其抗原性作用。

PSV通常在猪源细胞系中分离培养，例如LLC-PK或PK-15，但后来有学者发现(LiY,Du L,Jin T,Cheng Y,Zhang X,Jiao S,et al.Characterization andepidemiological survey of porcine sapelovirus in China；Bai H,Liu J,Fang L,Kataoka M,Takeda N,Wakita T,et al.Characterization of porcine sapelovirusisolated from Japanese swine with PLC/PRF/5cells)，它也可生长在除猪源细胞系之外的人源细胞系，乳仓鼠细胞系、绿猴细胞系等。