[发明专利]一种辅助侵染蛋白残基突变体蛋白、其重组体及在外泌酶固定化工艺中的应用

权利要求书

1.一种辅助侵染蛋白残基突变体蛋白，其特征在于，所述辅助侵染蛋白残基突变体蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

2.根据权利要求1所述的辅助侵染蛋白残基突变体蛋白，其特征在于，所述辅助侵染蛋白残基突变体蛋白的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

3.一种重组质粒，其特征在于，所述重组质粒包含权利要求2所述的辅助侵染蛋白残基突变体核苷酸序列的基因片段。

4.一种含辅助侵染蛋白残基突变体的重组菌体，其特征在于，所述重组菌体包含序列如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列。

5.根据权利要求4所述的含辅助侵染蛋白残基突变体的重组菌体，其特征在于，所述重组菌体的宿主选自谷氨酸棒杆菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌或乳酸菌中的一种。

6.一种含辅助侵染蛋白残基突变体的外泌活性酶重组菌体，其特征在于，所述外泌活性酶重组菌体包含序列如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列与酶蛋白融合表达。

7.根据权利要求6所述的含辅助侵染蛋白残基突变体的外泌活性酶重组菌体，其特征在于，所述的酶蛋白选自：谷氨酸脱羧酶gadB、谷胱甘肽合成酶gshF、多聚磷酸激酶ppk、γ-谷氨酰胺合成酶gmas、精氨酸脱亚胺酶ADI、精氨酸酶、葡萄糖脱氢酶GDH或甲酸脱氢酶FDH中的一种。

8.根据权利要求7所述的含辅助侵染蛋白残基突变体的外泌活性酶重组菌体，其特征在于，所述的谷氨酸脱羧酶gadB氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示；谷胱甘肽合成酶gshF的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示；多聚磷酸激酶ppk的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示；γ-谷氨酰胺合成酶gmas的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示；精氨酸脱亚胺酶ADI的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示；精氨酸酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示；葡萄糖脱氢酶GDH的氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示；甲酸脱氢酶FDH的氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示。

9.一种含辅助侵染蛋白残基突变体的外泌活性酶重组菌体在固定化工艺中的应用，其特征在于：包括利用权利要求8所述的重组菌体发酵所得的外泌活性酶在其生产菌株上的自固定化过程。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述自固定化过程还包括：所述重组菌体发酵所得的外泌活性酶在其生产菌株上自固定化后进行发酵培养，发酵培养结束后，通过调节温度为25-30℃，pH 6.0-8.5条件下，离心分离不溶物与反应溶液，将不溶物作为外泌活性酶再与其生产细胞固定化并进行下一个循环的发酵培养，如此循环发酵。