[发明专利]一种野生紫陀螺菌菌丝及其分离纯化方法

权利要求书

1.一种野生紫陀螺菌菌丝，其特征在于，所述野生紫陀螺菌菌丝为紫陀螺菌，已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏日为2022年05月23日，保藏编号为CGMCC NO.40193，其ITS序列如紫陀螺菌菌丝的序列1“紫陀螺菌菌丝的ITS序列”所示。

2.一种野生紫陀螺菌菌丝的分离纯化方法，其特征在于，所述分离纯化方法的步骤为：

(1)种菇挑选和处理：选取柱形期紫陀螺菌子实体作为种菇，对种菇进行消毒和晾干，并切成组织块；

(2)组织分离培养：将组织块接入改良MMN固体培养基，将培养基进行封口后转入恒温培养箱培养，获得初期菌丝体；

(3)初期菌丝菌悬液制备：将初期菌丝体和生理盐水混合后装入无菌均质袋中进行均质获得菌悬液；

(4)菌悬液液体发酵：将菌悬液接种在改良PDA+MMN综合液体培养基上，在振荡培养箱中以温度23-25℃、振荡速率165r/min的条件振荡培养15-20天，得到纯种紫陀螺菌菌丝球；

(5)单一菌丝球纯培养：将得到的纯种菌丝球接种在改良PDA+MMN综合固体培养基中，恒温培养获得纯化菌丝。

3.根据权利要求2所述的一种野生紫陀螺菌菌丝的分离纯化方法，其特征在于，所述(1)步骤中，种菇选用新鲜采摘的无开伞、无虫蛀，光滑直立，颜色由白渐变成紫色的柱形期紫陀螺菌子实体，组织块用柱形期基部1cm以上、顶部0.5cm以下的菌肉组织部分切成。

4.根据权利要求3所述的一种野生紫陀螺菌菌丝的分离纯化方法，其特征在于，所述(2)步骤中，将组织块接入改良MMN固体培养基中，采用封口膜密封培养皿缝隙，转入恒温培养箱于20-23℃环境下培养10-15天即可获得初期菌丝体。

5.根据权利要求4所述的一种野生紫陀螺菌菌丝的分离纯化方法，其特征在于，所述(3)步骤中，将初期菌丝体和0.85％的生理盐水装入无菌均质袋中，再使用速率为12.0次/秒的拍打式均质器均质10-15min，即获得菌悬液。

6.根据权利要求5所述的一种野生紫陀螺菌菌丝的分离纯化方法，其特征在于，所述(4)步骤中，将制得的菌悬液于无菌条件下接入改良PDA+MMN综合液体培养基中，在振荡培养箱中以温度23-25℃、振荡速率不小于165r/min的条件下振荡培养15-20天，即可获得纯种紫陀螺菌菌丝球。

7.根据权利要求6所述的一种野生紫陀螺菌菌丝的分离纯化方法，其特征在于，所述(5)步骤中，将培养的单个的纯种紫陀螺菌菌丝球挑取至改良PDA+MMN综合固体培养基中，恒温23-25℃条件下培养30-45天即可获得纯化菌丝。

8.根据权利要求7所述的一种野生紫陀螺菌菌丝的分离纯化方法，其特征在于，所述改良MMN固体培养基的组成配比为：葡萄糖1.0-3.0g/L、氯化铵0.2g/L、磷酸氢二钾0.5g/L、七水硫酸镁0.15g/L、1wt％氯化钠溶液2.5mL/L、1wt％氯化钙溶液5.0mL/L、1wt％三氯化铁溶液1.5mL/L、盐酸硫胺素1mg/L、琼脂粉15.0g/L、0.1g/mL的氨卡青霉素1mL/L、0.05g/mL的硫酸链霉菌素1mL/L。

9.根据权利要求8所述的一种野生紫陀螺菌菌丝的分离纯化方法，其特征在于，所述改良PDA+MMN综合液体培养基的组成配比为：去皮鲜马铃薯汁15.0g/L、葡萄糖25g/L、蛋白胨2.0g/L、磷酸氢二钾0.5g/L、七水硫酸镁0.15g/L、1wt％氯化钠溶液2.5mL/L、1wt％氯化钙溶液5.0mL/L、1wt％三氯化铁溶液1.5mL/L、盐酸硫胺素0.01g/L。

10.根据权利要求9所述的一种野生紫陀螺菌菌丝的分离纯化方法，其特征在于，所述改良PDA+MMN综合固体培养基的组成配比为：去皮鲜马铃薯汁15.0g/L、葡萄糖25g/L、蛋白胨2.0g/L、麦芽浸粉3.0g/L、磷酸氢二钾0.5g/L、七水硫酸镁0.15g/L、1wt％氯化钠溶液2.5mL/L、1wt％氯化钙溶液5.0mL/L、1wt％三氯化铁溶液1.5mL/L、盐酸硫胺素0.01g/L、吡哆素0.01g/L、琼脂20g/L。