[发明专利]一种生物催化合成芳香化合物的方法

权利要求书

1.一种生物催化合成芳香化合物的方法，其特征在于，所述方法利用底物通过全细胞反应液催化合成芳香化合物；所述底物为丁香酚或丁香油，所述全细胞反应液含有重组大肠杆菌；所述重组大肠杆菌由重组质粒构建；所述芳香化合物为阿魏酸和\或松柏醇和\或4-乙烯基愈创木酚和\或香兰素。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

步骤1、合成催化酶基因并制备重组质粒；

步骤2、利用步骤1得到的重组质粒构建所述重组大肠杆菌；

步骤3、利用步骤2得到的重组大肠杆菌制备全细胞催化剂；

步骤4、将步骤3得到的全细胞催化剂添加所述底物，进行发酵，得到发酵液；

步骤5、从步骤4获得的发酵液中提取芳香化合物，并进行检测。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述方法中所述步骤1中所述重组质粒包括重组质粒pETDuet-ado-pad，重组质粒pACYCDuet-pvvaoA-calAB以及重组质粒pACYCDuet-psvaoA-calAB；所述步骤2中所述重组大肠杆菌包括基因工程菌株Ecoli-VCAD和基因工程菌株Ecoli-SCAD；所述基因工程菌株Ecoli-VCAD由所述重组质粒pETDuet-ado-pad以及所述重组质粒pACYCDuet-pvvaoA-calAB转化入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞制得；所述基因工程菌株Ecoli-SCAD由所述重组质粒pETDuet-ado-pad以及所述重组质粒pACYCDuet-psvaoA-calAB转化入所述大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞制得。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法中所述重组质粒pETDuet-ado-pad包含所述芳香酚单加氧酶Ado和所述酚酸脱羧酶Pad基因片段；所述重组质粒pACYCDuet-pvvaoA-calAB包含所述香草醇氧化酶VaoA、所述松柏醇脱氢酶CalA、所述松柏醛脱氢酶CalB基因片段；所述pACYCDuet-psvaoA-calAB质粒包含所述芳香酚单加氧酶Ado和所述酚酸脱羧酶Pad基因片段。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述香草醇氧化酶VaoA的氨基酸序列如SEQID No.:1或SEQ ID No.:3所示，所述香草醇氧化酶VaoA的核苷酸序列如如SEQ ID No.:2或SEQ ID No.:4所示；所述松柏醇脱氢酶基因CalA的氨基酸序列如SEQ ID No.:5所示，所述松柏醇脱氢酶CalA的核苷酸序列如SEQ ID No.:6所示；所述松柏醛脱氢酶CalB的氨基酸序列如SEQ ID No.:7所示，所述松柏醛脱氢酶CalB的核苷酸序列如SEQ ID No.:8所示；所述芳香酚单加氧酶Ado的氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示，所述芳香酚单加氧酶Ado的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示；所述酚酸脱羧酶Pad的氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示，所述酚酸脱羧酶Pad的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示。