[发明专利]用于检测扩张型心肌病突变基因PLN和ACTC1的试剂及其应用

说明书

本发明涉及基因检测技术领域，具体涉及了用于检测突变基因PLN和ACTC1的试剂，试剂包括引物SEQ ID NO:5至SEQ ID NO:8。本发明提供的突变基因PLN和ACTC1可以作为临床辅助诊断的生物标志物，可以明确家系成员所检出变异的携带情况，并结合家系成员的临床表型及变异携带情况，明确变异致病性，对携带者进行风险评估，提前干预恶性心脏事件的发生。对扩张型心肌病的早期诊断，或者辅助临床判断具有重要意义。基于用于检测突变基因PLN和ACTC1的试剂开发的试剂盒，能够将携带PLN c.40_42delAGA、ACTC1 c.129GC变异的患者和正常人群区分开，并能够为有生育需求的受试者提供优生优育指导和遗传咨询，指导遗传阻断，有效减少患儿的出生。

技术领域

本发明涉及基因检测技术领域，尤其涉及用于检测扩张型心肌病突变基因PLN和ACTC1的试剂及其应用。

背景技术

扩张型心肌病(dilated cardiomyopathy,DCM)是一种异质性心肌病，以心室扩大和心肌收缩功能降低为特征，是引起心力衰竭棬心衰棭暍心律失常和猝死的常见疾病之一。1985年，美国Olmsted县的流行病学调查DCM患病率为36.5/10万(Codd MB,1989)。1990年欧洲报道DCM的5年病死率为15％～50％(Lomiajda M,1990)。2002年，中国分层整群抽样调查9个地区8080例正常人群，DCM患病率约为19/10万(王志民，2004)。2014年中国一项报道显示，767例DCM随访52个月病死率为42.24％(Liu X,2014)，给社会和家庭带来沉重负担。

导致DCM的病因复杂，由致病基因突变导致的DCM称为家族性DCM(FDCM)，主要相关基因有TTN、LMNA、MYH7、MYH6、TNNT2、ACTC1、BAG3、PLN、DMD、DES等。其中，PLN基因编码的蛋白是心肌中cAMP依赖性蛋白激酶的主要底物，是心肌肌浆网Ca²⁺-ATP酶在非磷酸化状态下的抑制剂，但在蛋白磷酸化后抑制被解除，激活Ca²⁺泵可提高肌肉松弛率，从而有助于β受体激动剂引起的心脏肌力反应。同时该蛋白还是心脏舒张功能的关键调节因子。ACTC1基因编码心肌α肌动蛋白，α肌动蛋白是细肌丝的主要蛋白，维持肌肉收缩和能量的产生，以维持心脏泵血功能。

基因检测对于患者临床诊断、危险分层、治疗及患者家属的早期预警非常重要，目前已发现与扩张型心肌病致病基因PLN和ACTC1的许多突变位点，进一步发现新的突变位点将有助于进一步研究扩张型心肌病，对扩张型心肌病的早期诊断，或者辅助临床诊断具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于针对上述缺陷，提供用于检测扩张型心肌病突变基因PLN和ACTC1的试剂及其应用。

本发明目的在于提供：用于检测突变基因PLN和ACTC1的试剂，所述试剂包括引物SEQ ID NO:5至SEQ ID NO:8；与野生型PLN基因的参考序列SEQ ID NO:9相比，所述PLN突变基因第40至42位缺失碱基AGA，编码核苷酸序列为SEQ ID NO:1；与野生型ACTC1基因的参考序列SEQ ID NO:11相比，所述ACTC1突变基因的第129位的碱基G突变为碱基C，编码核苷酸序列为SEQ ID NO:3。

优选地，与野生型PLN基因编码蛋白的氨基酸序列SEQ ID NO:10相比，所述PLN突变基因编码蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO:2；与所述野生型ACTC1基因编码蛋白的氨基酸序列SEQ ID NO:12相比，所述ACTC1突变基因编码蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO:4。

本发明还提供上述用于检测突变基因PLN和ACTC1的试剂在制备检测试剂盒中的应用，其特征在于，所述检测试剂盒包括PCR预混液、阴性对照试剂和阳性对照试剂。

本发明经过大量试验、研究和分析成功地筛选出突变基因PLN和ACTC1，并利用突变基因PLN和ACTC1开发出能够用于快速、灵敏、有效的检测试剂盒。突变基因PLN和ACTC1具体信息见下表：