[发明专利]一种构建系统性红斑狼疮流产小鼠模型的方法

说明书

本发明涉及一种构建系统性红斑狼疮流产小鼠模型的方法，包括以下步骤：取离体小鼠胸腺细胞，体外诱导胸腺细胞凋亡，获得细胞悬液；将人β2GPI加入细胞悬液中共培养，得到细胞结合免疫原；小鼠注射细胞结合免疫原，再间隔四次静脉注射HEPES缓冲液和LPS的混合溶液，获得免疫小鼠；将免疫小鼠与异性小鼠合笼饲养，阴道出现大量精子并观察到小鼠阴道栓视为妊娠第0天，妊娠第12～15天即为造模成功。本发明提供的方法，在自身免疫缺陷的基础上，达到了系统性红斑狼疮的临床表现，模型动物更为复杂，更接近临床病人的发病特征和表现，同时本发明动物模型的构建方法安全可靠、简便经济，提高了造模成功率和造模效率，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于动物模型构建技术领域，具体公开一种构建系统性红斑狼疮流产小鼠模型的方法。

背景技术

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种多器官自身免疫性疾病，常见于育龄期女性。SLE患者经改善治疗后生活质量改善，可以妊娠，但妊娠结局仍不理想。近年来临床发现，SLE患者妊娠期间流产的发病率大大增高，而SLE合并流产出现不良妊娠结局的风险也同样升高，由此可见两病之间关系密切。研究表明，SLE患者妊娠期间会出现蜕膜绒毛上C3、IgG、IgM等免疫复合物沉积，影响绒毛的物质交换功能，从而导致流产等不良妊娠结局的发生。妊娠时SLE的活动性对妊娠结局有重要影响：疾病静止的SLE患者预后良好，而疾病活动性、不可控的SLE患者流产率较高。有一些特定的自身抗体会导致流产的高风险(例如IgG抗磷脂抗体)。有研究显示，系统性红斑狼疮活动期患者与控制期、缓解期患者相比，其流产率明显更高。SLE合并妊娠患者不良妊娠结局发生率高达30％以上，远高于正常妊娠女性，使得妊娠曾一度成为SLE患者的禁忌。随着医学技术的发展及相关研究的深入，SLE合并妊娠的诊疗有了突破性进展，但仍属于高危妊娠，导致流产、胎死。但是目前该病发生的机制尚不清楚，同时目前亦缺乏一种理想的系统性红斑狼疮合并流产的动物模型，这给疾病的发病机制探讨以及治疗研究带来很大的不便。

现有技术提供了一种自身免疫型复发性流产小鼠模型的构建方法，该方法通过小鼠子宫腔注射人β2GPI诱导建立自身免疫型复发性流产小鼠模型，用于自身免疫型复发性流产及抗磷脂抗体综合征的发病机制研究、诊断及治疗的动物实验研究。但因为自身免疫性疾病范围较为笼统广泛，该方法没有较好的针对性。

因此，提供一种具有针对性的系统性红斑狼疮合并流产的动物模型对系统性红斑狼疮合并流产的研究具有重要的意义。

发明内容

鉴于以上技术问题，本发明提供以下技术方案：

本发明提供一种构建系统性红斑狼疮流产小鼠模型的方法，包括以下步骤：

取离体的小鼠胸腺细胞，体外诱导胸腺细胞凋亡，获得细胞悬液；

免疫原制备：将孵育7～10h的人β2GPI加入所述细胞悬液中共培养，得到细胞结合免疫原；

小鼠注射所述细胞结合免疫原，10～15min后，间隔四次静脉注射HEPES缓冲液和LPS的混合溶液，每次90～110μL；前两次混合溶液中LPS的含量为20～25μg，接种间隔2周；后两次混合溶液中LPS的含量为8～10μg，最后一次间隔1个月，获得免疫小鼠；

在第三次静脉注射HEPES缓冲液和LPS的混合溶液后且第四次静脉注射HEPES缓冲液和LPS的混合溶液前7天将所述免疫小鼠与异性小鼠合笼饲养，阴道出现大量精子并观察到小鼠阴道栓后的第12～15天，即为造模成功。

优选地，所述人β2GPI的加入量以所述细胞悬液中细胞总数计为20μg/10⁷个细胞。

优选地，所述共培养是将人β2GPI加入所述细胞悬液中在37℃下培养1～1.5h。