[发明专利]田阳番茄曲叶病毒侵染性克隆及其构建方法

权利要求书

1.一种田阳番茄曲叶病毒，其特征在于，所述田阳番茄曲叶病毒的核苷酸序列如SEQID No.1所示。

2.一种田阳番茄曲叶病毒侵染性克隆，其特征在于，所述田阳番茄曲叶病毒侵染性克隆中含有田阳番茄曲叶病毒的核苷酸序列，所述核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

3.田阳番茄曲叶病毒侵染性克隆的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括以下步骤：

将两个田阳番茄曲叶病毒基因组DNA片段构建到经SmaⅠ单酶切处理的植物表达载体上，得到田阳番茄曲叶病毒侵染性克隆，所述田阳番茄曲叶病毒基因组DNA序列如SEQ IDNo.1所示。

4.根据权利要求3所述田阳番茄曲叶病毒侵染性克隆的构建方法，其特征在于，所述植物表达载体为pGreenⅡ0229载体。

5.根据权利要求3所述田阳番茄曲叶病毒侵染性克隆的构建方法，其特征在于，田阳番茄曲叶病毒基因组DNA片段可以由以下2种方法制备得到：

a.由田阳番茄曲叶病毒侵染发病植株中提取总DNA，以总DNA为模板，进行PCR扩增，获得病毒基因组DNA片段；PCR扩增的引物对如SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示，或PCR扩增的引物对如SEQ ID No.4和SEQ ID No.5所示；

b.人工合成如SEQ ID No.1所示序列，获得病毒基因组DNA片段。

6.利用权利要求3-5任一项所述构建方法制备得到的田阳番茄曲叶病毒侵染性克隆。

7.含有权利要求6所述田阳番茄曲叶病毒侵染性克隆的重组菌。

8.根据权利要求7所述田阳番茄曲叶病毒侵染性克隆的重组菌，其特征在于，将田阳番茄曲叶病毒侵染性克隆导入农杆菌感受态细胞GV3101中，得到具有田阳番茄曲叶病毒侵染性克隆的重组菌。

9.一种田阳番茄曲叶病毒侵染性克隆的重组菌，其特征在于，所述重组菌名称为ToLCTyV，种属为Agrobacterium tumefaciens，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏日期2022年6月8日，保藏号为GDMCC No.62527。

10.权利要求6所述的田阳番茄曲叶病毒侵染性克隆、权利要求7-9任一项所述的重组菌在研究番茄黄化曲叶病病毒和/或番茄对番茄黄化曲叶病病毒抗性、番茄抗病材料的筛选中的应用。