[发明专利]用于微流控荧光免疫检测的组合物、芯片及其制备方法

说明书

本发明公开了一种用于微流控荧光免疫检测的组合物，包含质量浓度百分比为0.5％～5％的牛血清白蛋白、0.2％～5％的聚乙烯吡咯烷酮、0.5％～12％的糖类、0.05％～0.5％的吐温20以及缓冲液。本发明的组合物可使得荧光抗体在进行荧光免疫检测时，均匀充分地释放，同时避免荧光抗体的团聚。由于其制备过程简单，原料来源简单，便于在免疫诊断中广泛地应用。采用本发明组合物所制备的检测芯片，其反应区荧光抗体形状规整，芯片间差异小，同时可大幅度降低荧光抗体残留率。

技术领域

本发明涉及一种用于微流控荧光免疫检测的组合物、芯片及其制备方法，属于微流控荧光免疫检测技术领域。

背景技术

免疫诊断是应用免疫学的理论、技术和方法诊断疾病和测定免疫状态，是确定疾病的病因和病变部位，机体免疫状态是否正常的重要方法。免疫诊断广泛应用于医院、血站、体检中心，主要用于心肌疾病、肿瘤、传染病等检测，在现代医学领域发挥越来越大的作用。微流控荧光免疫检测技术是一种新型的快速诊断技术，其原理是将特异性的抗原或者抗体先固定于微流控通道中，将特异性抗体与荧光物质连接的复合物干燥于反应区，再配备滤血膜以及上盖，焊接制备成微流控检测芯片，后续检测时，样本流经反应区将荧光抗体冲刷下来，流至微流控通道中的包被位点进行特异性反应，最后通过测定包被位点的荧光强度并通过线性曲线，计算出待测物质的浓度，从而实现疾病的快速诊断。制作微流控荧光免疫检测芯片时，需要将荧光抗体干燥固定于微流控芯片反应区固相表面，在后续使用时，随着样本或者缓冲液流过，荧光抗体释放出来，以此来检测对应抗原。若荧光抗体直接与微流控芯片固相表面直接接触，由于微流控芯片一般是大分子有机物制成，会吸附蛋白物质，且在静电吸附、疏水作用力的作用下，荧光抗体很容易大量吸附在微流控芯片固相表面上，样本难以将其带入检测位点，进行免疫识别反应，从而影响检测结果的准确性；后续使用时，还容易引起荧光抗体现释放不充分、不均匀，使检测位点出现荧光不均匀等问题，影响检测结果；同时还会引起荧光抗体团聚等问题。这些问题，也是一直困扰微流控荧光免疫检测产品开发的技术难题。

发明内容

本发明是提供一种用于微流控荧光免疫检测的组合物，可使得荧光抗体在进行荧光免疫检测时，均匀充分地释放，同时避免荧光抗体的团聚。

为达到上述目的，本发明所采用的技术方案是：一种用于微流控荧光免疫检测的组合物，包含质量浓度百分比为0.5％～5％的牛血清白蛋白、0.2％～5％的聚乙烯吡咯烷酮、0.5％～12％的糖类、0.05％～0.5％的吐温20以及缓冲液。

优选地，所述糖类为浓度百分比为0.5％～6％蔗糖和0.5％～6％海藻糖的混合溶液。

优选地，包含质量浓度百分比为1％的牛血清白蛋白、1％的聚乙烯吡咯烷酮、0.5％的蔗糖、2％的海藻糖和0.05％的吐温20。

优选地，所述缓冲液包括Tris-HCl缓冲液或TAPS缓冲液，浓度为20～50mM。

一种用于微流控荧光免疫检测的组合物的制备方法，包括以下步骤：步骤一，按照权利要求1中所述质量浓度百分比，称取对应重量的牛血清白蛋白、聚乙烯吡咯烷酮和糖类加入缓冲液后溶解；步骤二，称取吐温20加入至步骤一的溶液后，再次搅拌溶解。

一种用于微流控荧光免疫检测的芯片，包含上述的组合物。

一种用于微流控荧光免疫检测的芯片的制备方法，包括以下步骤：将上述制备好的组合物加入芯片的反应区；待所述组合物干燥后，再将荧光抗体添加至已干燥的组合物上。

优选地，每片芯片上所述组合物的使用量为0.5μL～5μL。

优选地，采用点样仪将制备好的组合物加入芯片的反应区；采用点样仪/移液器将荧光抗体添加至已干燥的组合物上。

优选地，所述组合物的干燥方法包括晾干、烘干、风干或冻干，其中，烘干温度可为37℃，自然晾干、风干的时间为15min～30min。根据糖含量不同晾干时间不同，糖含量越高晾干时间越长。