[发明专利]一种检测肾损伤标志物胱抑素C荧光纳米传感器及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种检测肾损伤标志物胱抑素C荧光纳米传感器及其制备方法和应用，该制备包括将TPABDFN加入到THF水溶液中，再将BSA、戊二醛溶液分别加入到上述混合溶液中，室温避光封闭交联后，即合成荧光纳米传感器。本发明通过一步法制备得到BSA‑TPABDFN共聚物载体，利用木瓜蛋白酶与半胱氨酸蛋白酶抑制剂相互作用，合成具有AIE特性的有效检测胱抑素C的荧光传感器，并利用该荧光传感器建立了检测胱抑素C的荧光分析方法，利用传感器表面的BSA作为木瓜蛋白酶水解的底物，在木瓜蛋白酶存在的情况下，BSA‑AIEgen荧光强度随着胱抑素C浓度增加而增加，可以有效实现胱抑素C监测诊断和药物疗效评价。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种检测肾损伤标志物胱抑素C荧光纳米传感器及其制备方法和应用。

背景技术

糖尿病病人因为体内血糖长期升高，常伴有肾脏微血管病变，因此糖尿病肾病是糖尿病病人的常见并发症。由于肾脏有强大的代偿功能，糖尿病肾病发病早期临床症状不明显，因此临床需要能早期监测糖尿病病人肾小球、肾小管损伤的标志物。胱抑素C是一种分子量为13.3kDa的非糖基化半胱氨酸蛋白酶抑制剂。在生理条件下，胱抑素C可抑制内源性半胱氨酸酶的活性。此外，胱抑素C还参与炎症反应、癌症增殖、侵袭和转移的调节以及一些神经系统疾病。在体内胱抑素C以恒定的速率释放进血液，不与血浆蛋白结合。因此，它可被肾小球完全过滤，随后在肾近端小管内被重吸收和降解，不被肾小管分泌，也不再回到血液中。胱抑素C可以是判断肾小球滤过率的重要指标，能够反映肾小管的损伤程度。肾衰竭时，肾小球的滤过率下降，血液内胱抑素C的浓度增加，而肾小管功能损伤时，胱抑素C无法再被肾小管被重吸收或者分解，从而导致尿胱抑素C浓度显著增加。因此，胱抑素C是肾脏损伤的理想内源性标记物。建立一种简便、灵敏、准确的测定胱抑素C的方法具有重要意义。

至今为止，关于胱抑素C的测定已有许多免疫类的方法被报道，如单项免疫扩散法(SRID)，放射免疫测定(RIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、颗粒增强透射免疫比浊法(PETIA)和颗粒增强散射免疫比浊法(PENIA)等。这些方法利用了胱抑素C的抗原性，是基于胱抑素C与其抗体IgG的相互作用建立的。PETIA和PENIA是临床上应用最广泛的方法，但这两种方法均需要制备昂贵的抗体，检测成本高，限制了它们的应用。所以需要建立一种灵敏的非免疫方法，起码可以作为一种参考的检测方法。

发明内容

发明目的：针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种检测肾损伤标志物胱抑素C荧光纳米传感器(BSA-AIEgen)的制备方法，本发明制备的荧光纳米传感器针对现有检测胱抑素C的方法中存在的不足进行改进，解决了传统方法检测胱抑素C耗时长、成本高、操作繁琐等缺点。

本发明还提供所述荧光纳米传感器及其应用。

技术方案：为了实现上述目的，本发明所述一种检测肾损伤标志物胱抑素C荧光纳米传感器的制备方法，包括如下步骤：

将2-(4-溴苯基)-3-(4-(4-(二苯氨基)苯乙烯基)苯基)富马罗腈(TPABDFN)加入到四氢呋喃(THF)水溶液中，形成TPABDFN的THF水溶液，再将BSA、戊二醛溶液分别加入到上述混合溶液中，室温避光封闭交联后，去除THF，即合成用于检测肾损伤标志物胱抑素C的荧光纳米传感器(BSA-AIE纳米传感器)。

其中，所述2-(4-溴苯基)-3-(4-(4-(二苯氨基)苯乙烯基)苯基)富马罗腈结构如式I所示，其在THF水溶液中终浓度为60-100μM；

式I。进一步地，所述2-(4-溴苯基)-3-(4-(4-(二苯氨基)苯乙烯基)苯基)富马罗腈分子量为578.51Da(M.W.)，以下简称TPABDFN，其THF水溶液中终浓度为80μM。

其中，所述THF水溶液的中水的体积分数为80-90％。