[发明专利]一种促植物侧根发生发育有机提取物的制备方法及应用

权利要求书

1.一种促植物侧根发生发育的有机提取物的制备方法，其特征在于，包括以下制备步骤：

S1，青霉菌发酵物过100℃高温烘干，加入10倍量的95％的甲醇常温浸提24h，期间充分搅拌多次，回流提取3次，温度50℃-70℃，过滤，合并滤液，滤液置旋转蒸发仪减压浓缩，干燥后得到青霉菌发酵物甲醇总提取物的浸膏；

S2，在S1所得浸膏中加入2-5倍质量的蒸馏水充分溶解，再加入等体积的乙酸乙酯充分混合后移入大型层析柱静置12h，待溶液分成乙酸乙酯层、乳化层和水层后，弃乳化层和水层，收集乙酸乙酯层，将乙酸乙酯相装入旋蒸瓶，30℃-50℃水浴锅，减压浓缩，真空干燥，得到青霉菌发酵物乙酸乙酯提取物的浸膏；

S3，将S2所得乙酸乙酯提取物浸膏用乙酸乙酯重新溶解后，上20cm×200cm的硅胶柱，样品上柱后，用不同体积比的二氯甲烷和甲醇进行洗脱，分别收集不同比例的二氯甲烷和甲醇的馏分，每瓶收集150mL馏分，直至收集的洗脱液变为无色，每瓶馏分取5μL点GF254硅胶板，待样品干后将硅胶板置于装有饱和层析液的层析缸中展开，根据层析结果合并具有相同组分的馏分于旋蒸瓶中，40℃水浴锅，减压浓缩，真空干燥，得到的8组有机提取物，分别命名为E1、E2、E3、E7、E5、E6、E7、E8；

S4，将S3所得组分E7加适量甲醇溶解后，上6cm×150cm的硅胶柱，样品上柱后，用二氯甲烷和甲醇进行洗脱，收集二氯甲烷:甲醇＝1:1的馏分，共收集60管，每管收集10mL馏分，合并10-40管馏分，40℃减压浓缩，蒸干溶剂后，得到的青霉菌发酵物有机组分E7即为促植物侧根发生发育的青霉菌发酵物的有机提取物。

2.根据权利要求1所述的一种促植物侧根发生发育的有机提取物的制备方法，其特征在于，步骤S1中最佳温度为60℃。

3.根据权利要求1所述的一种促植物侧根发生发育的有机提取物的制备方法，其特征在于，步骤S2中最佳温度为40℃。

4.根据权利要求1所述的一种促植物侧根发生发育的有机提取物的制备方法，其特征在于，步骤S3与S4中分离硅胶的步骤为：

a、硅胶粉活化：将硅胶粉置于三角瓶中，用锡箔纸包好瓶口，置于110℃烘箱中活化2-3h，冷却后，用石油醚饱和，采用湿法装柱；

b、样品洗脱：样品上柱后，采用逐渐增加洗脱剂极性的方法进行洗脱，洗脱剂的配比为二氯甲烷:甲醇＝12:1、5:1、1:1，分别收集不同比例的二氯甲烷和和甲醇的馏分，每瓶收集150mL馏分，直至收集的洗脱液变为无色；

c、薄层层析示踪：将4cm×8cm的GF254硅胶板于110℃烘箱中活化2-3h，自然冷却后取出，用玻璃毛细管吸取适量样品，点于硅胶板基线上，用吹风机吹干溶剂后，置于装有氯仿和甲醇的饱和层析液的层析缸中展开，待溶剂前沿展至距离薄层板顶端1cm时，取出，吹干溶剂，用紫外分析仪进行显色。

5.根据权利要求4所述的一种促植物侧根发生发育的有机提取物的制备方法，其特征在于，步骤a中所述硅胶粉粒径为200-300目。

6.一种促植物侧根发生发育的青霉菌发酵物的有机提取物的应用，其特征在于，将如权利要求1至5任一项所述方法制备得到的青霉菌发酵物的有机提取物应用于促植物侧根发生发育，其最适浓度为10μg/mL。

7.一种促植物侧根发生发育的青霉菌发酵物的有机提取物的应用，其特征在于，将如权利要求1至5任一项所述方法制备得到的青霉菌发酵物的有机提取物应用于诱导植物侧根发生发育相关基因表达中。