[发明专利]一种醋酸加尼瑞克的纯化方法

权利要求书

1.一种醋酸加尼瑞克的纯化方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)纯化：以反相填料为固定相，以RP1-A和RP1-B为纯化流动相进行线性梯度洗脱；所述纯化流动相RP1-A为乙酸盐、离子配对剂和乙腈的酸性缓冲液；所述纯化流动相RP1-B为乙腈的水溶液；

所述乙酸盐和离子配对剂的酸性缓冲液选自乙酸铵-三氟乙酸缓冲液、乙酸钠-三氟乙酸缓冲液、乙酸钾-三氟乙酸缓冲液中的任意一种；其中，所述乙酸盐浓度为0.1-10mM，所述三氟乙酸的质量浓度为0.001％-5.0％；所述乙酸盐和离子配对剂的酸性缓冲液pH≤5.0；

(2)转盐：以反相填料为固定相，以乙酸盐和乙腈的水溶液为转盐流动相RP2-A2；

所述乙酸盐选自乙酸铵、乙酸钾、乙酸钠中的任意一种；其中，所述乙酸盐的浓度为80-1000mM；

(3)冲洗和洗脱：以乙腈的水溶液为洗脱流动相RP2-B进行冲洗；以乙酸和乙腈的水溶液为流动相RP2-A3，和以乙腈的水溶液为流动相RP2-B进行线性梯度洗脱。

2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于：所述步骤(3)冲洗和洗脱中以乙酸和乙腈的水溶液为流动相RP2-A3，其中乙酸的质量浓度为0.05％-5％；以乙腈的水溶液为流动相RP2-B，乙腈的质量浓度为5％。

3.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于：所述纯化和转盐使用的反相填料选自多孔二氧化硅颗粒或硅胶制成的固定相。

4.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于：通过粗肽预处理、一步反相层析纯化以及转盐进行纯化，其包括以下步骤：

(1)粗肽预处理：使用乙腈的水溶液溶解醋酸加尼瑞克粗肽；

(2)纯化：以十八烷基硅烷键合硅胶填料为固定相，乙酸铵-TFA和乙腈的酸性缓冲液为流动相RP1-A1，乙腈的水溶液为流动相RP1-B，进行线性梯度洗脱；

(3)转盐：以十八烷基硅烷键合硅胶填料为固定相，乙酸铵和乙腈的水溶液为转盐流动相RP2-A2；以乙酸和乙腈的水溶液为洗脱流动相RP2-A3，以乙腈的水溶液为洗脱流动相RP2-B，进行线性梯度洗脱。