[发明专利]RML脂肪酶的突变体及其应用

说明书

本发明公开了一种RML脂肪酶突变体及其应用，所述RML脂肪酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。所述突变体相较于野生型脂肪酶，其最适反应温度由原来的45℃变为20℃，且在最适反应温度20℃下的比活力提高到野生型脂肪酶的5倍，且最适反应pH发生了明显酸移，本发明的RML脂肪酶突变体更符合洗涤用品行业中对脂肪酶的温度和活力需求，具有较好的应用前景。

技术领域

本发明属于酶工程技术领域，具体地说，本发明涉及一种低温高活性的米黑根毛霉脂肪酶(RML)的突变体及其在制备洗涤用品中的应用。

背景技术

生物酶制剂作为洗涤助剂是合成洗涤剂工业发展过程中的重大技术进步之一，它促进了洗涤剂工业的可持续发展，是推动洗涤行业节能降耗、环保减排的重要解决方案之一。其发挥作用主要体现在以下几个方面：首先，酶作为一种活性生物催化剂，本身无毒，生物降解度高，不会对环境造成负担；其二，酶适用于低温环境，消费者可以在低温环境下洗涤，降低洗衣过程中的能耗；第三就是酶制剂具有非常理想的洗涤效果，可提升洗衣液的综合去污能力，解决洗涤剂不含碱性助剂导致的去污力差等问题。

低温洗涤对于降低能源消耗有着重要的意义。由于世界各地的洗涤温度都有很大不同，比如在亚洲的中国、日本都是常温洗涤，在冬季的洗涤温度可能低至10℃，同时为了节省能源，也强调低温洗涤，这就要求脂肪酶作用温度和稳定温度应选择在10-40℃。

洗涤剂用酶种类包括碱性蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶、脂肪酶等。其中脂肪酶对脂质具有水解活性，可去除油污和污渍。洗涤剂用脂肪酶在合成洗涤剂中广泛使用的是80年代末丹麦Novo公司推出的碱性脂肪酶Lipolase，该脂肪酶最适温度较高，限制了其应用。有调查显示目前欧洲的去污剂有75％加入了脂肪酶，日本加脂肪酶的洗衣粉约为55％，美国也有33％。面对全球资源匮乏及民众节能环保意识的增强，推广应用节能环保、绿色高效的洗涤剂势在必行。

目前，我国国内一些企业和研发机构相继投入到低温洗涤剂的研发和推广，推出了一系列低温速溶洗涤剂等。为了适应这一趋势，进一步开发和应用适用于低温化洗涤剂配方的脂肪酶迫在眉睫。筛选能在低温下具有高效催化活性的脂肪酶具有重要意义。

低温脂肪酶获取主要是通过两条途径：(1)、先从自然环境中(多指寒冷环境)，得到具有价值的低温微生物，通过样品采集→富集培养→划线分离→平板纯化→选择培养基→摇瓶复筛(酶活测定)，再进一步提高其活性；(2)、对已有开发具有价值的产脂肪酶的菌株进行诱变、育种、基因克隆等，提高其在低温环境下的活性和对底物的催化效率。

但目前报道的耐低温脂肪酶种类较少，难以满足应用需求。

发明内容

基于此，本发明的目的之一在于提供一种RML脂肪酶突变体，所述脂肪酶突变体在中低温下具有高活性。

实现上述发明目的的具体技术方案包括如下：

一种RML脂肪酶突变体，所述RML脂肪酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明还提供了上述RML脂肪酶突变体的编码基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，或其核苷酸序列为SEQ ID NO.3的反向序列。

本发明还提供了上述RML脂肪酶突变体或上述RML脂肪酶突变体的编码基因在制备洗涤用品中的应用。

在其中一些实施例中，所述洗涤用品为洗涤剂。

本发明还提供了一种洗涤剂，包括上述RML脂肪酶突变体。

本发明还提供了一种插入RML脂肪酶突变体的编码基因的重组表达载体。

本发明还提供了一种转入上述重组表达载体的重组工程菌。

在其中一些实施例中，所述重组工程菌的宿主菌为毕赤酵母。